Бакалавр
Дипломные и курсовые на заказ

Экспрессия, локализация и фосфорилирование изоформ киназы легких цепей миозина в клетках животных и человека

Диссертация: Экспрессия, локализация и фосфорилирование изоформ киназы легких цепей миозина в клетках животных и человека
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Целью настоящей работы являлось изучение локализации, экспрессии и посттрансляционных модификаций продуктов генетического локуса киназы легких цепей миозина в клетках позвоночных. Показано, что экспрессия обеих изоформ КЛЦМ в гладкомышечных клетках аорты регулируется периодическим растяжением и гепарином, а также зависит от состояния клеточных контактов. Установить внутриклеточное распределение… Читать ещё >

Содержание

  • Список сокращений, встречающихся в тексте диссертации
  • ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
  • 1. Роль КЛЦМ в клеточной подвижности, опосредованной миозином 11-го типа
    • 1. 1. Общая схема регуляции миозина II фосфорилированием
    • 1. 2. Фосфорилирование регуляторных легких цепей гладкомышечного и немышечного миозинов КЛЦМ
    • 1. 3. Фосфорилирование РЛЦ миозина другими протеинкиназами
    • 1. 4. Роль КЛЦМ в регуляции различных форм подвижности эукариотических клеток
  • 2. Молекулярная организация и функциональные свойства классической КЛЦМ
    • 2. 1. Доменная организация КЛЦМ
    • 2. 2. Активация КЛЦМ Са /кальмодулином
    • 2. 3. Связывание КЛЦМ с актином и миозином
    • 2. 4. Фосфорилирование КЛЦМ различными протеинкиназами и модуляция активности КЛЦМ
  • 3. Гзнетический локус КЛЦМ как пример комплексной транскрипционной единицы у эукариот
  • 4. Функциональные свойства продуктов генетического локуса КЛЦМ
    • 4. 1. Функциональные свойства К11Р
    • 4. 2. Функциональные свойства высокомолекулярной изоформы КЛЦМ
  • 5. Экспрессия продуктов генетического локуса КЛЦМ в тканях и клетках
    • 5. 1. Экспрессия КНР
    • 5. 2. Экспрессия изоформ КЛЦМ
  • ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТ
  • МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
  • Материалы
  • Реактивы и материалы для биохимических и молекулярно-биологических исследований
  • Реактивы и материалы для клеточно-биологических исследований
  • Методы
  • Биохимические и физико-химические методы
  • Определение концентрации белков
  • Электрофорез и денситометрия
  • Приготовление образцов клеток и тканей для электрофореза
  • Молекулярно-биологические методы
  • Создание и характеристика молекулярно-генетических конструкций
  • Иммунологические и иммунохимические методы
  • Получение антител N
  • Получение и характеристика моноклональных антител 2Б
  • Аффинная очистка антител к КЛР, КЛЦМ-108 и уникальному фрагменту КЛЦМ
  • Иммуноблоттинг
  • Иммуноф луоресценция
  • Иммунопреципитация
  • Клеточно-биологические методы
  • Выделение и культивирование клеток
  • Выделение и культивирование гладкомышечных клеток
  • Выделение и культивирование мезотелия
  • Культивирование линейных клеток
  • Экстракция КЛЦМ из культивируемых клеток
  • Ингибирование КЛЦМ в культивируемых клетках
  • Определение активации МАР-киназ
  • Определение активации р42/р44 и р38 МАРК
  • Определение активности JNK
  • Метаболическое мечение клеток Р и in vivo фосфорилирование КЛЦМ
  • Окрашивание клеток Cy3-N
  • Транзиторная трансфекция культивируемых клеток молекулярно-генетическими конструкциями
  • Органная культура аорты в режиме механической стимуляции
  • Статистический анализ
  • РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
  • Антитела, использованные для анализа экспрессии продуктов генетического локуса КЛЦМ
  • Экспрессия продуктов генетического локуса КЛЦМ в органах и тканях курицы
  • Внутриклеточная локализация КПЦМ
  • Локализация КЛЦМ-210 в гладкомышечных клетках
  • Локализация КЛЦМ-210 в немышечных клетках, трансфицированных плазмидой, кодирующей КЛЦМ-210-GFP
  • Некоторые функциональные свойства высокомолекулярной изоформы КЛЦМ
  • Анализ взаимодействия уникального фрагмента КЛЦМ-210 с элементами цитоскелета in vivo
  • Экстракция изоформ КЛЦМ из клеток
  • Влияние ингибиторов активности КЛЦМ на морфологию и состояние актинового цитоскелета клеток, экспрессирующих преимущественно одну изоформу КЛЦМ
  • Изучение экспрессии продуктов генетического локуса КЛЦМ в культивируемых сегментах аорты и гладкомышечных клетках аорты курицы
  • Экспрессия изоформ КЛЦМ в органной культуре гладкомышечной ткани аорты при механической стимуляции
    • 5. 2. Экспрессия продуктов генетического локуса КЛЦМ в первичных и пассированных ГМК
    • 5. 3. Влияние гепарина на экспрессию изоформ КЛЦМ в первичных и пассированных ГМК
  • 6. Фосфорилирование КЛЦМ в культуре ГМК аорты курицы
    • 6. 1. Фосфорилирование КЛЦМ при стимуляции ГМК окадаевой кислотой
    • 6. 2. Фосфорилирование КЛЦМ при стимуляции ГМК форсколином
    • 6. 3. Фосфорилирование КЛЦМ при стимуляции ГМК форболовым эфиром
  • ВЫВОДЫ

Экспрессия, локализация и фосфорилирование изоформ киназы легких цепей миозина в клетках животных и человека (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Киназа легких цепей миозина (КЛЦМ) — ключевой Сазависимый регулятор сокращения гладких мыщц и разнообразных форм подвижности немышечных клеток, таких как миграция, цитокинез, секреция и многих других.

Генетический локус гладкомьппечной/немьппечной КЛЦМ позвоночных имеет сложную организацию. Он кодирует три продукта: классическую КЛЦМ, молекулярная масса которой составляет 108 кДа, высокомолекулярную изоформу КЛЦМ с молекулярной массой 210 кДа и белок KRP (Kinase Related Protein). KRP представляет собой белок, идентичный по аминокислотной последовательности С-концевому домену КЛЦМ. Он экспрессируется с собственного промотора, который находится внутри интрона КЛЦМ. КЛЦМ-210 включает в себя всю последовательность и все функциональные домены КЛЦМ-108 и кроме того содержит протяженную уникальную последовательность, которая отсутствует у КЛЦМ-108. Несмотря на то, что структура гена КЛЦМ известна, никакие регуляторные единицы пока не найдены и молекулярно-генетические отношения двух изоформ КЛЦМ на сегодняшний день остаются невыясненными. Пока не понятно, являются ли они продуктами альтернативного сплайсинга или их экспрессия инициируется с альтернативных промоторов. Неизвестно также, как регулируется экспрессия этих белков в тканях и в процессе онтогенеза.

Свойства КЛЦМ-108 изучаются уже несколько десятков лет, в то время как КЛЦМ-210 была открыта совсем недавно. Известно, что КЛЦМ-210 тоже является протеинкиназой и фосфорилирует тот же субстрат, что и КЛЦМ-108, -регуляторные легкие цепи миозина II типа. Однако, другие свойства высокомолекулярной изоформы КЛЦМ изучены мало. Не известно ее внутриклеточное и тканевое распределение. Остается неясным, в чем заключаются функциональные различия двух изоформ.

Целью настоящей работы являлось изучение локализации, экспрессии и посттрансляционных модификаций продуктов генетического локуса киназы легких цепей миозина в клетках позвоночных.

В работе были поставлены следующие экспериментальные задачи:

1. Изучить локализацию изоформ КЛЦМ в тканях и их экспрессию в культивируемых гладкомышечных клетках. 9.

2. Установить внутриклеточное распределение КЛЦМ-210 и роль ее уникальной последовательности во взаимодействии с цитоскелетом.

3. Исследовать фосфорилирование КЛЦМ в культивируемых гладкомышечных клетках.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ВЫВОДЫ.

1. Установлено, что КЛЦМ-210 экспресснруется в основном в немышечных тканях и клетках (некоторых типах эпителия, эндотелии, фибробластах), а также в гладких мышцах аорты человека и животных, что предполагает участие КЛЦМ-210 в регуляции многообразных форм клеточной подвижности.

2. Впервые продемонстрировано, что КЛЦМ-210 локализуется совместно с микрофиламентами в культивируемых клетках. Во взаимодействии КЛЦМ-210 с микрофиламентами in vivo участвует ее уникальный N-концевой фрагмент. Он опосредует более прочное связывание КЛЦМ-210, по сравнению с КЛЦМ-108, с актиновым цитоскелетом и тем самым способствует его стабилизации.

3. Показано, что экспрессия обеих изоформ КЛЦМ в гладкомышечных клетках аорты регулируется периодическим растяжением и гепарином, а также зависит от состояния клеточных контактов.

4. Изучено фосфорилирование изЬформ КЛЦМ в культивируемых гладкомышечных клетках аорты курицы при стимуляции форболовым эфиром и форсколином. Установлено, что фосфорилирование КЛЦМ опосредуется р42егк2 МАРК, но не рЗ 8 МАРК, РКА и РКС.

Показать весь текст

Список литературы

  1. , А.В., Крымский, М.А., Чибалина, М.В., Кудряшов, Д.С., Ширинский В. П. (2000) Различия в форбол-зависимом фосфорилировании регуляторных белков и сокращении фазных и тонических гладких мышц. Цитология, 42: 378−391.
  2. , О.В., Бирюков, К.Г., Ширинский, В.П., Ткачук, В.А. (1996) Влияние периодического растяжения гладкомышечных клеток на экспрессию в них маркерных белков сократительного фенотипа. Физиологический журнал им. И. М. Сеченова 82: 16−21.
  3. Abe, М., Hasegawa, К. and Hosoya, Н. (1996) Activation of chicken gizzard myosin light chain kinase by Ca27calmodulin is inhibited by autophosphorylation. Cell Struct. Fund. 21, 183−188.
  4. Adelstein, R.S. and Conti, M.A. (1975) Phosphorylation of platelet myosin increases actin-activated myosin ATPase activity. Nature 256, 597−598.
  5. Adelstein, R.S. and Klee, C.B. (1981) Purification and characterization of smooth muscle myosin light chain kinase. J. Biol. Chem. 256, 7501−7509.
  6. Adelstein, R.S., Conti, M.A. and Anderson, W.Jr. (1973) Phosphorylation of human platelet myosin. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 70, 3115−3119.
  7. Adelstein, R.S., Conti, M.A., Hathaway, D. R and Klee, C.B. (1978) Phosphorylation of smooth muscle myosin light chain kinase by the catalytic subunit of adenosine 3': 5-monophosphate-dependent protein kinase. J. Biol. Chem. 253, 8347−8350.
  8. Alessi, D.R., Cuenda, A., Cohen, P., Dudley, D.T. and Saltiel, A.R.(1995) PD 98 059 is a specific inhibitor of the activation of mitogen-activated protein kinase kinase in vitro and in vivo. J. Biol. Chem. 270, 27 489−27 494.
  9. Amano, M., Ito, M., Kimura, K., Fukata, Y., Chihara, K., Nakano, Т., Matsuura, Y. and Kaibuchi, K. (1996) Phosphorylation and activation of myosin by Rho-associated kinase (Rho kinase). J. Biol. Chem. 271, 20 246−20 249.
  10. Applegate, D. and Pardee, J.D. (1992) Actin-facilitated assembly of smooth muscle myosin induces formation of actomyosin fibrils. J. Cell Biol. 117, 12 231 230.
  11. Au, Y.P., Kenagy, R.D., Clowes, M.M. and Clowes, A.W. (1993) Mechanisms of inhibition by heparin of vascular smooth muscle cell proliferation and migration. Haemostasis 23 Suppl 1, 177−182.
  12. Benian, G.M., Kiff, J.E., Neckelmann, N., Moerman, D.G. and Waterston, R.H. (1989) Sequence of an unusually large protein implicated in regulation of myosin activity in C. elegans. Nature 342, 45−50.
  13. Birukov, K.G., Shirinsky, V.P., Stepanova, O.V., Tkachuk, V.A., Hahn, A.W.A., Resink, T.J. and Smirnov, V.N. (1995) Stretch affects phenotype and proliferation of vascular smooth muscle cells. Mol. Cell. Biochem. 144, 131−139.
  14. , A.R. (1999) Molecular mechanisms of nonmuscle myosin-II regulation. Curr. Opin. Cell Biol. 11, 26−33.
  15. Busch, S.J., Martin, G.A., Barnhart, R.L., Mano, M., Cardin, A.D. and Jackson, R.L. (1992) Trans-repressor activity of nuclear glycosaminoglycans on Fos and Jun/AP-1 oncoprotein-mediated transcription. J. Cell Biol. 116, 31−42.
  16. , D.J. (1991) Control of growth and differentiation of vascular cells by extracellular matrix proteins. Annu. Rev. Physiol. 53, 161−177.
  17. Castellot, J.J.Jr, Addonizio, M.L., Rosenberg, R.D. and Karnovsky, M.J. (1981) Cultured endothelial cells produce a heparin-like inhibitor of smooth muscle cell growth. J. Cell Biol. 90, 372−379.
  18. Castellot, J.J.Jr., Wong, K., Herman, B., Hoover, R.L., Albertini, D.F., Wright, T.C., Caleb, B.L. and Karnovsky, M.J. (1985) Binding and internalization of heparin by vascular smooth muscle cells. J. Cell Physiol. 124, 13−20.
  19. Chamley-Campbell, J., Campbell, G.R. and Ross, R. (1979) The smooth muscle cell in culture. Physiol. Rev. 59, 1−61.
  20. Chew, T.L., Masaracchia, R.A., Goeckeler, Z.M. and Wysolmerski, R.B. (1998) Phosphorylation of non-muscle myosin II regulatory light chain by p21-activated kinase (gamma-PAK). J. Muscle Res. Cell Motil. 19, 839−54.
  21. Chrzanowska-Wodnicka, M. and Burridge, K. (1996) Rho-stimulated contractility drives the formation of stress fibers and focal adhesions. J. Cell Biol. 133, 14 031 415.
  22. Clowes, A.W., Clowes, M.M., Kocher, O., Ropraz, P., Chaponier, C. and Gabbiani, G. (1988) Arterial smooth muscle cells in vivo: relationship between actin isoform expression and mitogenesis and their modulation by heparin. J. Cell Biol. 107, 1939−1945.
  23. Collins, T., Pober, J.S., Gimbrone, M.A., Hammacher, J.A., Betsholtz, C., Westermark, B. and Heldin, C.H. (1987) Cultured human endothelial cells express platelet-derived growth factor A chain. Am. J. Pathol. 126, 7−12.
  24. Conti, M.A. and Adelstein, R.S. (1981) The relationship between calmodulin binding and phosphorylation of smooth muscle myosin kinase by the catalytic subunit of 3':5' cAMP-dependent protein kinase. J. Biol. Chem. 256, 3178−3181.
  25. Craig, R., Smith, R. and Kendrick-Jones, J. (1983) Light-chain phosphorylation controls the conformation of vertebrate non-muscle and smooth muscle myosin molecules. Nature 302, 436−439.
  26. Dabrowska, R., Aromatorio, D., Sherry, J.M. and Hartshorne, D.J. (1977) Composition of the myosin light chain kinase from chicken gizzard. Biochem. Biophys. Res. Commun. 78, 1263−1272.
  27. Dabrowska, R., Hinkins, S., Walsh, M.P. and Hartshorne, D.J. (1982) The binding of smooth muscle myosin light chain kinase to actin. Biochem. Biophys. Res. Commun. 107, 1524−1531.
  28. De Lanerolle, P., Adelstein, R.S., Feramisco, J.R. and Burridge, K. (1981) Characterization of antibodies to smooth muscle myosin kinase and their use in localizing myosin kinase in nonmuscle cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 78, 4738−4742.126
  29. De Lanerolle, P., Nishikawa, M., Yost, D.A. and Adelstein, R.S. (1984) Increased phosphorylation of myosin light chain kinase after an increase in cyclic AMP in intact smooth muscle. Science 223, 1415−1417.
  30. Desmouliere, A., Rubbia-Brandt, L. and Gabbiani, G. (1991) Modulation of actin isoform expression in cultured arterial smooth muscle cells by heparin and culture conditions. Arterioscler. Thromb. 11, 244−253.
  31. Dudley, D.T., Pang, L., Decker, S.J., Bridges, A.J. and Saltiel, A.R. (1995) A synthetic inhibitor of the mitogen-activated protein kinase cascade. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 7686−7689.
  32. Edelman, A.M., Higgins, D.M., Bowman, C.L., Haber, S.N., Rabin, R.A. and Cho-Lee, J. (1992) Myosin light chain kinase is expressed in neurons and glia: immunoblotting and immunocytochemical studies. Brain Res. Mol. Brain. Res. 14, 27−34.
  33. , H. (1996) Actions of heparin in the atherosclerotic process. Pharmacol. Rev. 48, 327−352.
  34. Ferrari, M.B., Ribbeck, K., Hagler, D.J. and Spitzer, N.C. (1998) A calcium signaling cascade essential for myosin thick filament assembly in Xenopus myocytes."/. Cell Biol. 141, 1349−1356.
  35. Fisher, S. A. and Ikebe, M. (1995) Developmental and tissue distribution of expression of nonmuscle and smooth muscle isoforms of myosin light chain kinase. Biochem. Biophys. Res. Commun. 217, 696−703.
  36. Fishkind, D.J., Cao, L.G. and Wang, Y.L. (1991) Microinjection of the catalytic fragment of myosin light chain kinase into dividing cells: effects on mitosis and cytokinesis. J. Cell Biol. 114, 967−975.
  37. Foyt, H.L. and Means, A.R. (1985) Characterization and analysis of an apparent autophosphorylation of chicken gizzard myosin light chain kinase. J. Cyclic Nucleotide Protein Phosphor. Res. 10, 143−155.
  38. Fritze, L.M., Reilly, C.F. and Rosenberg, R.D. (1985) An antiproliferative heparan sulfate species produced by postconfluent smooth muscle cells. J. Cell Biol. 100, 1041−1049.
  39. Gallagher, P. J., Garcia, J. G. and Herring, B. P. (1995) Expression of a novel myosin light chain kinase in embryonic tissues and cultured cells. J. Biol. Chem. 270, 29 090−29 095.
  40. Gallagher, P.J. and Herring, B.P. (1991) The carboxyl terminus of the smooth muscle myosin light chain kinase is expressed as an independent protein, telokin. J. Biol. Chem. 266, 23 945−23 952.
  41. Gallagher, P.J. and Stull, J.T. (1997) Localization of an actin binding domain in smooth muscle myosin light chain kinase. Mol. Cell Biochem. 173, 51−57.
  42. Gallagher, P.J., Herring, B.P. and Stull, J.T. (1997) Myosin light chain kinases. J. Muscle Res. CellMotil. 18, 1−16.
  43. Gallagher, P.J., Herring, B.P., Griffin, S.A. and Stull, J.T. (1991) Molecular characterization of a mammalian smooth muscle myosin light chain kinase. J. Biol. Chem. 266, 23 936−23 944.
  44. Garcia, J.G., Lazar, V., Gilbert-McClain, L.I., Gallagher, P.J. and Verin, A.D. (1997) Myosin light chain kinase in endothelium: molecular cloning and regulation. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 16, 489−494.
  45. Garcia, J.G., Verin, A.D., Schaphorst, K., Siddiqui, R., Patterson, C.E., Csortos, C. and Natarajan, V. (1999) Regulation of endothelial cell myosin light chain kinase by Rho, cortactin, and p60src. Am. J. Physiol. 276, L989-L998.
  46. Geuss, U., Mayr, G.W. and Heilmayer, L.M.G., JR. (1985) Steady-state kinetics of skeletal muscle myosin light chain kinase indicate a strong down regulation by products. Eur. J. Biochem. 153, 327−334.
  47. Gilbert-McClain, L.I., Verin, A.D., Shi, S., Irwin, R.P. and Garcia, J.G. (1998) Regulation of endothelial cell myosin light chain phosphorylation and permeability by vanadate. J. Cell Biochem. 70, 141−155.
  48. Goeckeler, Z.M. and Wysolmerski, R.B. (1995) Myosin light chain kinase-regulated endothelial cell contraction: the relationship between isometric tension, actin polymerization, and myosin phosphorylation. J. Cell Biol. 130, 613−627.
  49. Goldberg, J., Nairn, A.C. and Kuriyan, J. (1996) Structural basis for the autoinhibition of calcium/calmodulin-dependent protein kinase I. Cell 84, 875 887.
  50. Gorecka, A., Aksoy, M.O. and Hartshorne, D.J. (1976) The effect of phosphorylation of gizzard myosin on actin activation. Biochem. Biophys. Res. Commun. 71, 325−331.
  51. Gotoh, Y., Nishida, E., Matsuda, S., Shiina, N., Kosako, H., Shiokawa, K., Akiyama, T., Ohta, K. and Sakai, H. (1991) In vitro effects on microtubule dynamics of purified Xenopus M phase-activated MAP kinase. Nature 349, 251 254.
  52. Guerriero, V. Jr., Rowley, D.R. and Means, A.R. (1981) Production and characterization of an antibody to myosin light chain kinase and intracellular localization of the enzyme. Cell 27, 449−458.
  53. Guyton, J.R., Rosenberg, R.D., Clowes, A.W. and Karnovsky, M.J. (1980) Inhibition of rat arterial smooth muscle cell proliferation by heparin. I. In vivo studies with anticoagulant and nonanticoagulant heparin. Circ. Res. 46, 625−634.
  54. Hannan, R.L., Kourembanas, S., Flanders, K.C., Rogelj, S.J., Roberts, A.B., Faller, D.V. and Klagsbrun, M. (1988) Endothelial cells synthesize basic fibroblast growth factor and transforming growth factor beta. Growth Factors 1, 7−17.
  55. Hashimoto, Y. and Soderling, T.R. (1990) Phosphorylation of smooth muscle myosin light chain kinase by Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II: comparative study of the phosphorylation sites. Arch. Biochem. Biophys. 278, 4145.
  56. Hashimoto, Y., Sasaki, H., Togo, M., Tsukamoto, K., Horie, Y., Fukata, H., Watanabe, T. and Kurokawa, K. (1994) Roles of myosin light-chain kinase in platelet shape change and aggregation. Biochim. Biophys. Acta 1223, 163−169.
  57. Hathaway, D.R. and Adelstein, R.S. (1979) Human platelet myosin light chain kinase requires the calcium- binding protein calmodulin for activity. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 76, 1653−1657.
  58. Hathaway, D.R., Adelstein, R.S. and Klee, C.B. (1981) Interaction of calmodulin with myosin light chain kinase and cAMP-dependent protein kinase in bovine brain. J. Biol. Chem. 256, 8183−8189.
  59. Hayakawa, K., Okagaki, T., Higashi-Fujime, S. and Kohama, K. (1994) Bundling of actin filaments by myosin light chain kinase from smooth muscle. Biochem. Biophys. Res. Commun. 199, 786−791.
  60. Herbert, J.M., Clowes, M., Lea, H.J., Pascal, M. amd Clowes, A.W. (1996) Protein kinase C alpha expression is required for heparin inhibition of rat smooth muscle cell proliferation in vitro and in vivo. J. Biol. Chem. 271, 25 928−25 935.
  61. Herring, B.P. and Smith, A.F. (1996) Telokin expression is mediated by a smooth muscle cell-specific promoter. Am. J. Physiol. 270, C1656-C1665.
  62. Herring, B.P. and Smith, A.F. (1997) Telokin expression in A10 smooth muscle cells requires serum response factor. Am. J. Physiol. 272, C1394-C1404.
  63. Herring, B.P., Nunnally, M.H., Gallagher, P.J. and Stall, J.T. (1989) Molecular characterization of rat skeletal muscle myosin light chain kinase. Am. J. Physiol. 256, C399-C404.
  64. Holden, H.M., Ito, M., Hartshorne, D.J. and Rayment, I. (1992) X-ray structure determination of telokin, the C-terminal domain of myosin light chain kinase, at 2,8 A resolution. J. Mol. Biol. 227, 840−851.
  65. Holzapfel, G., Wehland, J. and Weber, K. (1983) Calcium control of actin-myosin based contraction in triton models of mouse 3T3 fibroblasts is mediated by the myosin light chain kinase (MLCK)-calmodulin complex. Exp. Cell Res. 148, 117−126.
  66. Hoover, R.L., Rosenberg, R.D., Haering, W. and Karnovsky, M.J. (1980) Inhibition of rat arterial smooth muscle cell proliferation by heparin. II. In vitro studies. Circ. Res. 47, 578−583.
  67. Horowitz, A., Menice, C.B., Laporte, R. and Morgan, K.G. (1996) Mechanisms of smooth muscle contraction. Physiol. Rev. 76, 967−1003.
  68. House, C. and Kemp, B.E. (1987) Protein kinase C contains a pseudosubstrate prototope in its regulatory domain. Science 238, 1726−1728.
  69. Ikebe, M., Stepinska, M., Kemp, B.E., Means, A.R. and Hartshorae, D.J. (1987b) Proteolysis of smooth muscle myosin light chain kinase. Formation of inactive and calmodulin-independent fragments. J. Biol. Chem. 262, 13 828−13 834.
  70. Ishihara, M., Fedarko, N.S. and Conrad, H.E. (1986) Transport of heparan sulfate into the nuclei of hepatocytes. J. Biol. Chem. 261, 13 575−13 580.
  71. Ishikawa, T., Chijiwa, T., Hagiwara, M., Mamiya, S., Saitoh, M. and Hidaka, H.1988) ML-9 inhibits the vascular contraction via the inhibition of myosin light chain phosphorylation. Mol. Pharmacol. 33, 598−603.
  72. Ito, M., Dabrowska, R., Guerriero, V., Jr. and Hartshorne, D.J. (1989) Identification in turkey gizzard of an acidic protein related to the C-terminal portion of smooth muscle myosin light chain kinase. J. Biol. Chem. 264, 1 397 113 974.
  73. Ito, M., Guerriero, V.J., Chen, X.M. and Hartshorne, D.J. (1991) Definition of the inhibitory domain of smooth muscle myosin light chain kinase by site-directed mutagenesis. Biochemistry 30, 3498−3503.
  74. Itoh, T., Ikebe, M., Kargacin, G.J., Hartshorne, D.J., Kemp, B.E. and Fay, F.S.1989) Effects of modulators of myosin light-chain kinase activity in single smooth muscle cells. Nature 338, 164−167.
  75. Jian, X., Hidaka, H. and Schmidt, J.T. (1994) Kinase requirement for retinal growth cone motility. J. Neurobiol. 25, 1310−1328.
  76. Jian, X., Szaro, B.G. and Schmidt, J.T. (1996) Myosin light chain kinase: expression in neurons and upregulation during axon regeneration. J. Neurobiol. 31,379−391.
  77. Johnson, J.D., Holroyde, M.J., Crouch, T.H., Solaro, RJ. and Potter, J.D. (1981) Fluorescence studies of the interaction of calmodulin with myosin light chain kinase. J. Biol. Chem. 256, 12 194−12 198.
  78. Johnson, J.D., Snyder, C., Walsh, M. and Flynn, M. (1996) Effects of myosin light chain kinase and peptides on Ca2+ exchange with the N- and C-terminal Ca2+ binding sites of calmodulin. J. Biol. Chem. 271, 761−767.
  79. Kanoh, S., Ito, M., Niwa, E., Kawano, Y. and Hartshorne, D.J. (1993) Actin-binding peptide from smooth muscle myosin light chain kinase. Biochemistry 32, 8902−8907.
  80. Kawamoto, S., Bengur, A.R., Sellers, J.R. and Adelstein, R.S. (1989) In situ phosphorylation of human platelet myosin heavy and light chains by protein kinase C. J. Biol Chem. 264, 2258−2265.
  81. Kemp, B.E., Pearson, R.B., Guerriero, V.J., Bagchi, I.C. and Means, A.R. (1987) The calmodulin binding domain of chicken smooth muscle myosin light chain kinase contains a pseudosubstrate sequence. J. Biol. Chem. 262, 2542−2548.
  82. Kerrick, W.G. and Bourguignon, L.Y. (1984) Regulation of receptor capping in mouse lymphoma T cells by Ca2±activated myosin light chain kinase. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 81, 165−169.
  83. Klemke, R.L., Cai, S., Giannini, A.L., Gallagher, P.J., De Lanerolle, P. and Cheresh, D.A. (1997) Regulation of cell motility by mitogen-activated protein kinase. J. Cell Biol. 137, 481−492.
  84. Knighton, D.R., Pearson, R.B., Sowadski, J.M., Means, A.R., Ten Eyck, L.F., Taylor, S.S. and Kemp, B.E. (1992) Structural basis of the intrasteric regulation of myosin light chain kinases. Science 258, 130−135.
  85. Knighton, D.R., Zheng, J.H., Ten Eyck, L.F., Ashford, V.A., Xuong, N.H., Taylor, S.S. and Sowadski, J.M. (1991) Ciystal structure of the catalytic subunit of cyclic adenosine monophosphate-dependent protein kinase. Science 253, 407 414.
  86. Kobayashi, H., Inoue, A., Mikawa, T., Kuwayama, H., Hotta, Y., Masaki, T. and Ebashi, S. (1992) Isolation of cDNA for bovine stomach 155 kDa protein exhibiting myosin light chain kinase activity. J. Biochem. 112, 786−791.
  87. Kojima, S., Mishima, M., Mabuchi, I. and Hotta, Y. (1996) A single Drosophila melanogaster myosin light chain kinase gene produces multiple isoforms whose activities are differently regulated. Genes. Cells. 1, 855−871.
  88. Kokoza, V.A. and Raikhel, A.S. (1997) Ovarian- and somatic-specific transcripts of the mosquito clathrin heavy chain gene generated by alternative 5'-exon splicing and polyadenylation. J. Biol. Chem. 272, 1164−1170.
  89. Kolodney, M.S. and Elson, E.L. (1993) Correlation of myosin light chain phosphorylation with isometric contraction of fibroblasts. J. Biol. Chem. 268, 23 850−23 855.
  90. Kolodney, M.S. and Wysolmerski, R.B. (1992) Isometric contraction by fibroblasts and endothelial cells in tissue culture: a quantitative study. J. Cell Biol. 117, 73−82.
  91. Komatsu, S. and Hosoya, H. (1996) Phosphorylation by MAPKAP kinase 2 activates Mg (2+)-ATPase activity of myosin II. Biochem. Biophys. Res. Commun. 223, 741−745.132
  92. Kumar, R.S., Thekkumkara, T.J. and Sen, G.C. (1991) The mRNAs encoding the two angiotensin-converting isozymes are transcribed from the same gene by a tissue-specific choice of alternative transcription initiation sites. J. Biol. Chem. 266, 3854−3862.
  93. Kureishi, Y., Kobayashi, S., Amano, M., Kimura, K., Kanaide, H., Nakano, T., Kaibuchi, K. and Ito, M. (1997) Rho-associated kinase directly induces smooth muscle contraction through myosin light chain phosphorylation. J. Biol. Chem. 272, 12 257−12 260.
  94. Labeit, S., Gautel, M., Lakey, A. and Trinick, J. (1992) Towards a molecular understanding of titin. EMBO J. 11, 1711−1716.
  95. , U.K. (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680−685.
  96. Lazar, V. and Garcia, J.G. (1999) A single human myosin light chain kinase gene (MLCK- MYLK). Genomics 57, 256−267.
  97. Lin, P.j., Luby-Phelps, K. and Stall, J.T. (1997) Binding of myosin light chain kinase to cellular actin-myosin filaments. J. Biol. Chem. 272, 7412−7420.133
  98. Lokeshwar, V.B. and Bourguignon, L.Y. (1992) The involvement of Ca and myosin light chain kinase in collagen-induced platelet activation. Cell Biol. Int. Rep. 16, 883−897.
  99. Ludowyke, R.I., Peleg, I., Beaven, M.A. and Adelstein, R.S. (1989) Antigen-induced secretion of histamine and the phosphorylation of myosin by protein kinase C in rat basophilic leukemia cells. J. Biol. Chem. 264, 12 492−12 501.
  100. Lukas, T.J., Burgess, W.H., Prendergast, F.G., Lau, W. and Watterson, D.M. (1986) Calmodulin binding domains: characterization of a phosphorylation and calmodulin binding site from myosin light chain kinase. Biochem. 25, 1458−1464.
  101. Lukas, T.J., Mirzoeva, S. and Watterson D.M. (1998) Myosin light chain kinase. In: Calmodulin and signal transduction (Van Eldik, L.J. and Watterson, D.M. Eds.), Academic Press, San Diego, 78−100.
  102. Ma, X., Wang, Y. and Stephens, N.L. (1998) Serum deprivation induces a unique hypercontractile phenotype of cultured smooth muscle cells. Am. J. Physiol. 274, C1206-C1214.
  103. Majercik, M.H. and Bourguignon, L.Y. (1985) Insulin receptor capping and its correlation with calmodulin-dependent myosin light chain kinase. J. Cell Physiol. 124, 403−410.
  104. Majercik, M.H. and Bourguignon, L.Y. (1988) Insulin-induced myosin light-chain phosphorylation during receptor capping in IM-9 human B-lymphoblasts. Biochem. J. 252, 815−823.
  105. Matsumura, F., Ono, S., Yamakita, Y., Totsukawa, G. and Yamashiro, S. (1998) Specific localization of serine 19 phosphorylated myosin II during cell locomotion and mitosis of cultured cells. J. Cell Biol. 140, 119−129.
  106. Mills, J.C., Stone, N.L., Erhardt, J. and Pittman, R.N. (1998) Apoptotic membrane blebbing is regulated by myosin light chain phosphorylation. J. Cell Biol. 140, 627−636.
  107. Miralem, T. and Templeton, D.M. (1998) Heparin inhibits Ca27calmodulin-dependent kinase II activation and c-fos induction in mesangial cells. Biochem. J. 330, 651−657.
  108. Miralem, T., Wang, A., Whiteside, C.I. and Templeton, D.M. (1996) Heparin inhibits mitogen-activated protein kinase-dependent and -independent c-fos induction in mesangial cells. J. Biol. Chem. 271, 17 100−17 106.
  109. Mochida, S., Nonomura, Y. and Kobayashi, H. (1994) Analysis of the mechanism for acetylcholine release at the synapse formed between rat sympathetic neurons in culture. Microsc. Res. Tech. 29, 94−102.
  110. Morgan, M., Perry, S.V. and Ottaway, J. (1976) Myosin light-chain phosphatase. Biochem. J. 157, 687−697.134
  111. Morrison, D.L., Sanghera, J.S., Stewart, J., Sutherland, C., Walsh, M.P. and Pelech, S.L. (1996) Phosphorylation and activation of smooth muscle myosin light chain kinase by MAP kinase and cyclin-dependent kinase-1. Biochem. Cell Biol. 74, 549−557.
  112. Murata-Hori, M., Suizu, F., Iwasaki, T., Kikuchi, A. and Hosoya, H. (1999) ZIP kinase identified as a novel myosin regulatory light chain kinase in HeLa cells. FEBS Lett. 451, 81−84.
  113. , R.A. (1989) Special topic: contraction in smooth muscle cells. Annu. Rev. Physiol. 51, 275−283.
  114. Nabeshima, Y., Fujii-Kuriyama, Y., Muramatsu, M. and Ogata, K. (1984) Alternative transcription and two modes of splicing results in two myosin light chains from one gene. Nature 308, 333−338.
  115. Nishikawa, M., Sellers, J.R., Adelstein, R.S. and Hidaka, H. (1984b) Protein kinase C modulates in vitro phosphorylation of the smooth muscle heavy meromyosin by myosin light chain kinase. J. Biol. Chem. 259, 8808−8814.
  116. Nishikawa, M., Shirakawa, S. and. Adelstein, R.S. (1985) Phosphorylation of smooth muscle myosin light chain kinase by protein kinase C. Comparative study of the phosphorylated sites. J. Biol. Chem. 260, 8978−8983.
  117. Olson, N.J., Pearson, R.B., Needleman, D.S., Hurwitz, M.Y., Kemp, B.E. and Means, A.R. (1990) Regulatory and structural motifs of chicken gizzard myosin light chain kinase. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 87, 2284−2288.
  118. Ottlinger, M.E., Pukac, L.A. and Karnovsky, M.J. (1993) Heparin inhibits mitogen-activated protein kinase activation in intact rat vascular smooth muscle cells. J. Biol. Chem. 268, 19 173−19 176.
  119. , G.K. (1995) Regulation of differentiation of vascular smooth muscle cells. Physiol. Rev. 75, 487−517.
  120. Park, C.S., Chang, S.H., Lee, H.S., Kim, S.H., Chang, J.W. and Hong, C.D. (1996) Inhibition of renin secretion by Ca2+ through activation of myosin light chain kinase. Am. J. Physiol. 271, C242-C2477.
  121. Pearson, R.B., Jakes, R., John, M., Kendrick-Jones, J. and Kemp, B.E. (1984) Phosphorylation site sequence of smooth muscle myosin light chain (Mr = 20 000). FEBS Lett. 168, 108−112.135
  122. Pearson, R.B., Misconi, L.Y. and Kemp, B.E. (1986) Smooth muscle myosin kinase requires residues on the COOH- terminal side of the phosphorylation site. Peptide inhibitors. J. Biol. Chem. 261, 25−27.
  123. Pearson, R.B., Wettenhall, R.E., Means, A.R., Hartshorne, D.J. and Kemp, B.E. (1988) Autoregulation of enzymes by pseudosubstrate prototopes: myosin light chain kinase. Science 241, 970−973.
  124. , S.M. (1980) The phosphorylated L2 light chain of skeletal myosin is a modifier of the actomyosin ATPase. J. Biol. Chem. 255, 8836−8841.
  125. Persechini, A., McMillan, K. and Leakey, P. (1994) Activation of myosin light chain kinase and nitric oxide synthase activities by calmodulin fragments. J. Biol. Chem. 269, 16 148−16 154.
  126. Persechini, A., Gansz, K.J. and Paresi, R.J. (1996) Activation of myosin light chain kinase and nitric oxide synthase activities by engineered calmodulins with duplicated or exchanged EF hand pairs. Biochemistry 35, 224−228.
  127. Potier, M.C., Chelot, E., Pekarsky, Y., Gardiner, K., Rossier, J. and Turnell, W.G. (1995) The human myosin light chain kinase (MLCK) from hippocampus: cloning, sequencing, expression, and localization to 3qcen-q21. Genomics 29, 562−570.
  128. Pukac, L.A., Carter, J.E., Ottlinger, M.E. and Karnovsky, M.J. (1997) Mechanisms of inhibition by heparin of PDGF stimulated MAP kinase activation in vascular smooth muscle cells. J. Cell Physiol. 172, 69−78.
  129. Reusch, P., Wagdy, H., Reusch, R, Wilson, E. and Ives, H.E. (1996) Mechanical strain increases smooth muscle and decreases nonmuscle myosin expression in rat vascular smooth muscle cells. Circ. Res. 79, 1046−1053.
  130. Robinson, M.J. and Cobb, M.H. (1997) Mitogen-activated protein kinase pathways. Curr. Opin. Cell Biol. 9, 180−186.
  131. Rusconi, F., Potier, M.C., Le Caer, J.P., Schmitter, J.M. and Rossier, J. (1997) Characterization of the chicken telokin heterogeneity by time-of-flight mass spectrometry. Biochemistry 36, 11 021−11 026.
  132. Russo, M.A., Guerriero, V.Jr. and Means, A. R (1987) Hormonal regulation of a chicken oviduct messenger ribonucleic acid that shares a common domain with gizzard myosin light chain kinase. Mol. Endocrinol. 1, 60−67.
  133. Saitoh, M., Ishikawa, T., Matsushima, S., Naka, M. and Hidaka, H. (1987) Selective inhibition of catalytic activity of smooth muscle myosin light chain kinase. J. Biol. Chem. 262, 7796−7801.136
  134. Saksela, O., Moscatelli, D., Sommer, A. and Rifkin, D.B. (1088) Endothelial cell-derived heparan sulfate binds basic fibroblast growth factor and protects it from proteolytic degradation. J. Cell Biol. 107, 743−751.
  135. Sanders, L.C., Matsumura, F., Bokoch, G.M. and De Lanerolle P. (1999) Inhibition of myosin light chain kinase by p21-activated kinase. Science 283, 2083−2085.
  136. Sato, M., Ye, L.H. and Kohama, K. (1995) Myosin light chain kinase from vascular smooth muscle inhibits the ATP-dependent interaction between actin and myosin by binding to actin. J. Biochem. 118, 1−3.
  137. Schaffner, W. and Wetasman, O. (1973) Sensitive and spesific method for the determination of protein in dilute solution. Anal. Biochem. 56, 502−514.
  138. , J.R. (1985) Mechanism of the phosphorylation-dependent regulation of smooth muscle heavy meromyosin. J. Biol. Chem. 260, 15 815−15 819.
  139. Sellers, J.R. and Pato, M.D. (1984) The binding of smooth muscle myosin light chain kinase and phosphatases to actin and myosin. J. Biol. Chem. 259, 77 407 746.
  140. Sellers, J.R., Spudich, J.A. and Sheetz, M.P. (1985) Light chain phosphorylation regulates the movement of smooth muscle myosin on actin filaments. J. Cell Biol. 101, 1897−1902.
  141. Shimada, H., Shimizu, T., Kuwayama, H., Suzuki, M., Nagai, R. and Morii, H. (1995) Immunocytochemical localization of 155 kDa myosin light chain kinase and myosin heavy chain in bovine brain. Brain Res. 682, 212−214.
  142. Silver, D.L., Vorotnikov, A.V., Watterson, D.M., Shirinsky, V.P. and Sellers, J.R. (1997) Sites of interaction between kinase-related protein and smooth muscle myosin. J. Biol. Chem. 272, 25 353−25 359.
  143. Smith, A.F., Bigsby, R.M., Word, R.A. and Herring, B.P. (1998) A 310-bp minimal promoter mediates smooth muscle cell-specific expression of telokin. Am. J. Physiol. 274, C1188-C1195.137
  144. Smith, J.L., Silveira, L.A. and Spudich, J.A. (1996) Activation of Dictyostelium myosin light chain kinase A by phosphorylation of Thrl66. EMBO J. 15, 60 756 083.
  145. Smith, P.G., Moreno, R. and Ikebe, M. (1997) Strain increases airway smooth muscle contractile and cytoskeletal proteins in vitro. Am. J. Physiol. 272, L20-L27.
  146. Smith, L., Su, X., Lin, P., Zhi, G. and Stull, T.J. (1999a) Identification of a novel actin binding motif in smooth muscle myosin light chain kinase. J. Biol. Chem. 274, 29 433−29 438
  147. Smith, P.G., Roy, C., Dreger, J. and Brozovich, F.(1999b) Mechanical strain increases velocity and extent of shortening in cultured airway smooth muscle cells. Am. J. Physiol. 277, L343-L348.
  148. , A. (1991) Regulation of smooth-muscle myosin-light-chain-kinase. Steady-state kinetic studies of the reaction mechanism. Eur. J. Biochem. 199, 735−743.
  149. Somlyo, A. V., Butler, T.M., Bond, M. and Somlyo, A.P. (1981) Myosin filaments have non-phosphorylated light chains in relaxed smooth muscle. Nature 294, 567 569.
  150. Stull, J.T., Hsu, L., Tansey, M.G. and Kamm, K.E. (1990) Myosin light chain kinase phosphorylation in tracheal smooth muscle. J. Biol. Chem. 265, 1 668 316 690.
  151. Stull, J.T., Kraeger, J.K., Kamm, K.E., Gao, Z.-H., Zhi, G. and Padre, R.C. (1996) Myosin light chain kinase. In: Biochemistry of smooth muscle contraction (Barany, M. Ed.), Academic Press, San Diego. 119−130.
  152. Stull, J.T., Lin, P.J., Krueger, J.K., Trewhella, J. and Zhi, G. (1998) Myosin light chain kinase: functional domains and structural motifs. Acta Physiol. Scand. 164, 471−482.
  153. Stull, J.T., Nunnally, M.N. and Michnoff, C.H. (1986) Calmodulin-dependent protein kinases. In: The Enzymes (Krebs, E.G. and Boyer, P.D. Eds), Academic Press, New York. 113−166.
  154. Stull, J.T., Tansey, M.G., Tang, D.-C., Word, R.A., Kamm, K.E. and Tang, D.C. (1993) Phosphorylation of myosin light chain kinase: a cellular mechanism for Ca2+ desensitization. Mol. Cell Biochem. 127/128, 229−237.
  155. Sugden, P.H. and Clerk, A. (1998) 'Stress-responsive' mitogen-activated protein kinases (c-Jun N-terminal kinases and p38 mitogen-activated protein kinases) in the myocardium. Circ. Res. 83, 345−352.
  156. Sweeney, H.L., Bowman, B.F. and Stull, J.T. (1993) Myosin light chain phosphorylation in vertebrate striated muscle: regulation and function. Am. J. Physiol. 264, C1085-C1095.138
  157. Tail, J.L. and Spudich, J.A. (1991) Characterization and bacterial expression of the Dictyostelium myosin light chain kinase cDNA. Identification of an autoinhibitory domain. J. Biol. Chem. 266, 16 044−16 049.
  158. Tan, J.L., Ravid, S. and Spudich, J.A. (1992) Control of nonmuscle myosins by phosphorylation. Annu. Rev. Biochem. 61, 721−759.
  159. Taubman, M.B., Grant, J.W.and Nadal-Ginard, B. (1987) Cloning and characterization of mammalian myosin regulatory light chain (RLC) cDNA: the RLC gene is expressed in smooth, sarcomeric, and nonmuscle tissues. J. Cell. Biol. 104, 1505−1513.
  160. Thekkumkara, T.J., Livingston 3d, W., Kumar, R.S. and Sen, G.C. (1992) Use of alternative polyadenylation sites for tissue-specific transcription of two angiotensin-converting enzyme mRNAs. Nucleic Acids Res. 20, 683−687.
  161. Tokui, T., Ando, S. and Ikebe, M. (1995) Autophosphorylation of smooth muscle myosin light chain kinase at its regulatory domain. Biochemistry 34, 5173−5179.
  162. Torok, K. and Trentham, D.R. (1994) Mechanism of 2-chloro-(epsilon-amino-Lys75)-6-[4-(N, N-diethylamino)phenyl.-l, 3,5-triazin-4-yl]calmodulin interactions with smooth muscle myosin light chain kinase and derived peptides. Biochemistry 33, 12 807−12 820.
  163. Towbin, H., Staehlin, T. and Gordon, J. (1970) Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 76, 4350−4354.
  164. Tuazon, P.T. and Traugh, J.A. (1984) Activation of actin-activated ATPase in smooth muscle by phosphorylation of myosin light chain with protease-activated kinase I. J. Biol. Chem. 259, 541−546.
  165. Turbedsky, K., Pollard, T.D. and Bresnick, A.R. (1997) A subset of protein kinase C phosphorylation sites on the myosin II regulatory light chain inhibits phosphorylation by myosin light chain kinase. Biochemistry 36, 2063−2067.
  166. Turner, J.R., Angle, J.M., Black, E.D., Joyal, J.L., Sacks, D.B. and Madara, J.L. (1999) PKC-dependent regulation of transepithelial resistance: roles of MLC and MLC kinase. Am. J. Physiol. 277, C554-C562.
  167. Umemoto, S. and Sellers, J.R. (1990) Characterization of in vitro motility assays using smooth muscle and cytoplasmic myosins. J. Biol. Chem. 265, 14 864−14 869.
  168. Umemoto, S., Bengur, A.R. and Sellers, J.R. (1989) Effect of multiple phosphorylations of smooth muscle and cytoplasmic myosins on movement in an in vitro motility assay. J. Biol. Chem. 264, 1431−1436.
  169. Verin, A.D., Gilbert-McClain, L.I., Patterson, C.E. and Garcia, J.G. (1998b) Biochemical regulation of the nonmuscle myosin light chain kinase isoform in bovine endothelium. Am. J. Respir. CellMol. Biol. 19, 767−776.
  170. Verin, A.D., Lazar, V., Torry, R.J., Labarrere, C.A., Patterson, C.E. and Garcia, J.G. (1998a) Expression of a novel high molecular-weight myosin light chain kinase in endothelium. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 19, 758−766.
  171. Waters, S.B., Holt, K.H., Ross, S.E., Syu, L.J., Guan, K.L., Saltiel, A.R., Koretzky, G.A. and Pessin, J.E. (1995) Desensitization of Ras activation by a feedback disassociation of the SOS-Grb2 complex. J. Biol. Chem. 270, 2 088 320 886.
  172. Watterson, D.M., Collinge, M.A., Lukas, T.J., Van-Eldik, L.J., Birukov, K.G., Stepanova, O.V. and Shirinsky, V.P. (1995) Multiple gene products are produced from a novel protein kinase transcription region. FEBS Lett. 373, 217−220.
  173. Wilson, A.K., Gorgas, G., Claypool, W.D. and de Lanerolle, P. (1991) An increase or a decrease in myosin II phosphorylation inhibits macrophage motility. J. Cell Biol. 114, 277−283.
  174. Wysolmerski, R.B. and Lagunoff, D. (1990) Involvement of myosin light-chain kinase in endothelial cell retraction. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 87,16−20.
  175. Wysolmerski, R.B. and Lagunoff, D. (1991) Regulation of permeabilized endothelial cell retraction by myosin phosphorylation. Am. J. Physiol. 261, C32-C40.
  176. Yamakita, Y., Yamashiro, S. and Matsumura, F. (1994) In vivo phosphorylation of regulatory light chain of myosin II during mitosis of cultured cells. J. Cell Biol. 124, 129−137.
  177. Yerna, M.J., Dabrowska, R., Hartshorne, D.J. and Goldman, R.D. (1979) Calcium-sensitive regulation of actin-myosin interactions in baby hamster kidney (BHK-21) cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 76, 184−188.
  178. Zavodny, P.J., Petro, M.E., Lonial, H.K., Dailey, S.H., Narula, S.K., Leibowitz, P.J. and Kumar, C.C. (1990) Cloning and characterization of a vertebrate cellular myosin regulatory light chain complementary DNA. Circ. Res. 67, 933−940.
  179. Zhi, G., Herring, B.P. and Stull, J.T. (1994) Structural requirements for phosphorylation of myosin regulatory light chain from smooth muscle. J. Biol. Chem. 269, 24 723−24 727.
  180. Я благодарю доктора Т. Н. Власик и В. Спирова за создание антител 2F4 к уникальному фрагменту КЛЦМ-210, а также доктора Б. В. Шехонина за сотрудничество.
  181. Я благодарю своего рецензента Богачеву Наталью Владимировну за внимательное прочтение моей работы, ценные замечания и внесенные исправления.
  182. Я глубоко признательна биофаку Московского государственного университета за данное мне мировоззрение. Я благодарю преподавателей кафедры биохимии за полученные мною базовые знания и навыки биохимической работы.
Заполнить форму текущей работой

Сдать сессию!