Лабораторная работа № 9 «Хроматографическое разделение аминокислот»

Цель работы. Познакомиться с техникой выполнения хроматографии в тонком слое (ТСХ). Разделить и идентифицировать смесь аминокислот при помощи тонкослойной хроматографии (закрепленный слой) с использованием «свидетелей».

Приборы и реактивы. Пластины «Silufol». Химический стакан (V = 500 мл). Чашка Петри. Стеклянные капилляры. Хроматографическая бумага. Пульверизатор. Растворы аминокислот (свидетели). н-Бутанол. Уксусная кислота. Вода дистиллированная. Раствор нингидрина в ацетоне.

Порядок выполнения работы.

• 1. Получить у преподавателя пластину «Silufol», смесь аминокислот и «свидетели».
• 2. Простым карандашом на расстоянии 1,0 см от нижнего края пластины провести прямую — линия старта и отметить на ней 4 точки на одинаковом расстоянии друг от друга.
• 3. При помощи капилляров, специально приготовленных для каждого раствора, последовательно нанести капельки растворов исследуемой смеси аминокислот и «свидетелей» так, чтобы наносимая капля была не более 0,5 см в диаметре. Нанесение раствора повторить 5−8 раз, каждый раз только после того, когда предыдущая капля высохнет.
• 4. После высыхания всех нанесенных капель пластину поместить в хроматографическую камеру, в которую предварительно налить смесь растворителей (элюент) — н-бутилового спирта, уксусной кислоты и воды (4: 1: 5 по объему). Высота слоя растворителя не должна превышать 1 см от дна камеры.
• 5. Пластинку поместить в камеру таким образом, чтобы растворитель был не выше линии старта.
• 6. Вынуть пластину после того, когда фронт растворителя окажется на расстоянии 1 см от верхнего края пластинки (фронт растворителя).
• 7. Осторожно вынуть пластину, отметить простым карандашом фронт растворителя и оставить ее для просушивания.
• 8. После полного высушивания растворителя пластину необходимо проявить. Для чего опрыскать ее из пульверизатора раствором нингидрина в ацетоне. При взаимодействии нингидрина с аминокислотой образуется окрашенное соединение.
• 9. Для ускорения проявки поместить пластину в сушильный шкаф до появления лиловых пятен. Появившиеся пятна необходимо обвести простым карандашом (рис. 3).

Рис. 3. Хроматограмма разделения смеси аминокислот

10. Качественный состав контрольной смеси аминокислот определяют по величине фактора удерживания (Rf) каждого пятна путем сравнения с Rf для «свидетелей».

R_f — отношение скорости движения зоны компонента к скорости движения жидкой подвижной фазы.

Таблица 7

11. По полученным результатам заполнить таблицу.

Таблица 8

• 12. Установить, каков состав предложенного Вам преподавателем раствора смеси аминокислот.
• 13. Сделать вывод.