Люминесцентно-микроскопические методы исследований в микробной экологии

Для облегчения выявления и более точного количественного учета бактерий и других микроорганизмов в естественных субстратах и в первую очередь в воде или почве используют различные флуоресцирующие красители.

Методы флуоресцентной микроскопии применяют давно. Так, например, метод учета бактерий с помощью флуорссцеин-изотиоцианата (fluorescein isothiocyanate, FITC), описанный в 1970 г., используют до сих пор.

Методология люминесцентно-микроскопического метода достаточно проста. Клетку обрабатывают соответствующим химическим веществом. Происходит связывание этого вещества с какими-то клеточными структурами. При освещении такой обработанной красителем суспензии клеток светом соответствующей длины волны комплекс клетка-краситель начинает светиться и в результате клетка становится различимой для глаза или/и прибора, например проточного флоуцитометра. С помощью люминесцентной микроскопии можно проводить обнаружение и учет как бактерий, так и грибов.

В настоящее время разработаны еще более совершенные красители и методы, позволяющие быстро дифференцировать живые, физиологически активные клетки и неживые и проводить их выявление и учет в одном препарате. Это наборы реактивов и прописи по их применению — «LIVE/DEAD Вас Light Bacterial Viability Kits».

Разновидностью люминесцентно-микроскопических методов являются иммунофлуорссцентные методы. В последнем случае происходит специфическое связывание антител с поверхностными антигенами клеток, при этом антитела или уже несут соответствующий флуоресцентный краситель, или проводят обработку соответствующим флуоресцентным красителем уже образовавшийся комплекс антиген-антитело. В обоих случаях при освещении такой клеточной суспензии светом с соответствующей длиной волны комплекс клетка-антитело-краситель начинает светиться, становится различим и доступен для обнаружения и учета.

В отличие от простых люминесцентно-микроскопических методов с помощью иммунофлуоресцентных методов можно выявить и учесть только те микроорганизмы, к которым были приготовлены антитела, т. е. такие микроорганизмы должны быть выделены в чистую культуру.

С помощью обычных люминесцентно-микроскопических методов можно выявлять и учитывать любые микроорганизмы, еще не известные и не культивируемые.

Детальное описание иммунофлуоресцентных методов исследований в отечественной литературе можно найти в монографии П. А. Кожевина (1989).