Π‘Π°ΠΊΠ°Π»Π°Π²Ρ€
Π”ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌΠ½Ρ‹Π΅ ΠΈ курсовыС Π½Π° Π·Π°ΠΊΠ°Π·

ΠœΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ пСрСсадки ядСр ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ, ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΠ²ΠΈΡ€ΡƒΠ΅ΠΌΡ‹Ρ… in vitro

Π Π΅Ρ„Π΅Ρ€Π°Ρ‚ΠŸΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒ Π² Π½Π°ΠΏΠΈΡΠ°Π½ΠΈΠΈΠ£Π·Π½Π°Ρ‚ΡŒ ΡΡ‚ΠΎΠΈΠΌΠΎΡΡ‚ΡŒΠΌΠΎΠ΅ΠΉ Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Ρ‹

Π•Ρ‰Π΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΈΠΌ способом получСния трансгСнных ΠΌΠ»Π΅ΠΊΠΎΠΏΠΈΡ‚Π°ΡŽΡ‰ΠΈΡ… являСтся использованиС трансформированных Π³Π΅Π½Π½Ρ‹ΠΌΠΈ конструкциями ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹Ρ… Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΉ. Π‘ ΡΡ‚ΠΎΠΉ Ρ†Π΅Π»ΡŒΡŽ ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ‹ ΠΊΠ°ΠΊ стволовыС ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹Π΅ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ, Ρ‚Π°ΠΊ ΠΈ ΡΠΎΠΌΠ°Ρ‚ичСскиС ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠΈ, ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΠ²ΠΈΡ€ΡƒΠ΅ΠΌΡ‹Π΅ in vitro. Π’ΠΏΠ΅Ρ€Π²Ρ‹Π΅ экспрСссия Π³Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… конструкций Π² ΡΠΎΠΌΠ°Ρ‚ичСских тканях Ρ…ΠΈΠΌΠ΅Ρ€Π½Ρ‹Ρ… ΠΌΡ‹ΡˆΠ΅ΠΉ, ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… с ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ трансформированных ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ ΡΠΌΠ±Ρ€ΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠΉ… Π§ΠΈΡ‚Π°Ρ‚ΡŒ Π΅Ρ‰Ρ‘ >

ΠœΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ пСрСсадки ядСр ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ, ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΠ²ΠΈΡ€ΡƒΠ΅ΠΌΡ‹Ρ… in vitro (Ρ€Π΅Ρ„Π΅Ρ€Π°Ρ‚, курсовая, Π΄ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½Ρ‚Ρ€ΠΎΠ»ΡŒΠ½Π°Ρ)

Π•Ρ‰Π΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΈΠΌ способом получСния трансгСнных ΠΌΠ»Π΅ΠΊΠΎΠΏΠΈΡ‚Π°ΡŽΡ‰ΠΈΡ… являСтся использованиС трансформированных Π³Π΅Π½Π½Ρ‹ΠΌΠΈ конструкциями ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹Ρ… Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΉ. Π‘ ΡΡ‚ΠΎΠΉ Ρ†Π΅Π»ΡŒΡŽ ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ‹ ΠΊΠ°ΠΊ стволовыС ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹Π΅ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ, Ρ‚Π°ΠΊ ΠΈ ΡΠΎΠΌΠ°Ρ‚ичСскиС ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠΈ, ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΠ²ΠΈΡ€ΡƒΠ΅ΠΌΡ‹Π΅ in vitro. Π’ΠΏΠ΅Ρ€Π²Ρ‹Π΅ экспрСссия Π³Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… конструкций Π² ΡΠΎΠΌΠ°Ρ‚ичСских тканях Ρ…ΠΈΠΌΠ΅Ρ€Π½Ρ‹Ρ… ΠΌΡ‹ΡˆΠ΅ΠΉ, ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… с ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ трансформированных ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ ΡΠΌΠ±Ρ€ΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠ°Ρ€Ρ†ΠΈΠ½ΠΎΠΌΡ‹, Π±Ρ‹Π»Π° Π΄ΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½Π° Stewart с ΡΠΎΠ°Π²Ρ‚ΠΎΡ€Π°ΠΌΠΈ [1985]. Доля Ρ…ΠΈΠΌΠ΅Ρ€Π½Ρ‹Ρ… ΠΌΡ‹ΡˆΠ΅ΠΉ Π±Ρ‹Π»Π° ΠΎΡ‡Π΅Π½ΡŒ высокой, ΠΏΡ€ΠΈΡ‡Π΅ΠΌ Ρ‡Π°ΡΡ‚ΡŒ ΠΈΠ· Π½ΠΈΡ… ΠΏΠ΅Ρ€Π΅Π΄Π°Π²Π°Π»Π° трансгСн ΠΏΠΎ Π½Π°ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡ‚Π²Ρƒ. Однако Π² Π½Π°ΡΡ‚оящСС врСмя наибольшСС распространСниС для получСния Ρ…ΠΈΠΌΠ΅Ρ€Π½Ρ‹Ρ… ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡ‚Π½Ρ‹Ρ… ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠΌΠ±Ρ€ΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Π΅ стволовыС ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠΈ, ЭБК [Robertson et al., 1986]. ΠŸΡ€Π΅ΠΈΠΌΡƒΡ‰Π΅ΡΡ‚Π²ΠΎΠΌ получСния трансгСнных ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡ‚Π½Ρ‹Ρ… с ΠΏΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒΡŽ трансформированных стволовых ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ являСтся Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ тСстирования ΠΈΠ½Ρ‚Π΅Π³Ρ€Π°Ρ†ΠΈΠΈ трансгСна Π² ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΡƒΡ€Π΅ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ. Π­Ρ‚ΠΎ ΠΎΠ·Π½Π°Ρ‡Π°Π΅Ρ‚, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄Ρ‹ΠΉ эмбрион, Ρ€Π°Π·Π²ΠΈΠ²ΡˆΠΈΠΉΡΡ Π² ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΡƒΡ€Π΅ послС пСрСсадки ядСр, Π±ΡƒΠ΄Π΅Ρ‚ трансгСнным ΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡƒΡŽΡ‰Π°Ρ сСлСкция трансгСнных эмбрионов Π½Π΅ Ρ‚рСбуСтся. ΠšΡ€ΠΎΠΌΠ΅ Ρ‚ΠΎΠ³ΠΎ, пСрСсадка Ρ‚Π°ΠΊΠΈΡ… эмбрионов Ρ€Π΅Ρ†ΠΈΠΏΠΈΠ΅Π½Ρ‚Π°ΠΌ ΠΏΡ€ΠΈΠ²Π΅Π΄Π΅Ρ‚ ΠΊ Ρ€ΠΎΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΡŽ Ρ‚ΠΎΠ»ΡŒΠΊΠΎ трансгСнного потомства. ИспользованиС для получСния трансгСнных ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡ‚Π½Ρ‹Ρ… трансформированных ЭБК Π΄Π΅Π»Π°Π΅Ρ‚ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½Ρ‹ΠΌ Π² Ρ€ΡΠ΄Π΅ случаСв ΠΏΡ€ΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ‚ΡŒ ΠΎΡ†Π΅Π½ΠΊΡƒ экспрСссии трансгСнов, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ‚ Π½Π΅ΠΌΠ°Π»ΠΎΠ²Π°ΠΆΠ½ΠΎΠ΅ Π·Π½Π°Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅. ΠŸΡ€ΠΈ ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΈΠ½ΡŠΠ΅ΠΊΡ†ΠΈΠΈ трансгСны Π½Π°ΡƒΠ³Π°Π΄ ΠΈΠ½Ρ‚Π΅Π³Ρ€ΠΈΡ€ΡƒΡŽΡ‚ΡΡ Π² Π»ΡŽΠ±ΡƒΡŽ Ρ‡Π°ΡΡ‚ΡŒ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ°. Π­Ρ‚ΠΎ ΠΎΠ·Π½Π°Ρ‡Π°Π΅Ρ‚, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΎΠ½ΠΈ ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ Ρ€Π°Π·Ρ€ΡƒΡˆΠ°Ρ‚ΡŒ вСсьма сущСствСнныС Π³Π΅Π½Ρ‹ (инсСрционныС ΠΌΡƒΡ‚Π°Ρ†ΠΈΠΈ) ΠΈΠ»ΠΈ Ρ€Π°Π·ΠΌΠ΅Ρ‰Π°Ρ‚ΡŒΡΡ Π² Ρ‚Π΅Ρ… частях хромосомы, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ нСдоступны для транскрипции. ВСстированиС экспрСссии Π² ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΡƒΡ€Π΅ сдСлаСт Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½Ρ‹ΠΌ использованиС для пСрСсадки ядСр, Π° ΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎ ΠΈ Π΄Π»Ρ получСния трансгСнных ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡ‚Π½Ρ‹Ρ… Ρ‚ΠΎΠ»ΡŒΠΊΠΎ Ρ‚Π΅Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹Ρ… Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΉ, Π² ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Ρ… трансгСны ΡΠ²Π»ΡΡŽΡ‚ΡΡ транскрипционно ΠΈ Ρ‚рансляционно Π°ΠΊΡ‚ΠΈΠ²Π½Ρ‹ΠΌΠΈ. ΠšΡ€ΠΎΠΌΠ΅ Ρ‚ΠΎΠ³ΠΎ, Π² ΠΎΡ‚Π»ΠΈΡ‡ΠΈΠ΅ ΠΎΡ‚ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Π° ΠΏΡ€ΠΎΠ½ΡƒΠΊΠ»Π΅Π°Ρ€Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΡŠΠ΅ΠΊΡ†ΠΈΠΈ исслСдованиС ЭБК позволяСт Ρ†Π΅Π»Π΅Π½Π°ΠΏΡ€Π°Π²Π»Π΅Π½Π½ΠΎ Π²ΠΎΠ·Π΄Π΅ΠΉΡΡ‚Π²ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ Π½Π° Π³Π΅Π½ΠΎΠΌ посрСдством Π³Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Ρ…Ρ…Ρ…Ρ…Ρ…Ρ…Ρ…Ρ…Ρ…Ρ… БСнсационноС сообщСниС Π±Ρ‹Π»ΠΎ ΠΎΠΏΡƒΠ±Π»ΠΈΠΊΠΎΠ²Π°Π½ΠΎ Π² 1996 Π³ΠΎΠ΄Ρƒ Π² Nature. Π‘Ρ‹Π»Π° продСмонстрирована Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ получСния ТизнСспособных ΠΎΠ²Π΅Ρ† посрСдством пСрСсадки ядСр соматичСских ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ, ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΠ²ΠΈΡ€ΡƒΠ΅ΠΌΡ‹Ρ… in vitro. ПозТС сообщили ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½ΠΈΠΈΡ‚рансгСнных ΠΎΠ²Π΅Ρ† посрСдством пСрСсадки ядСр ΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎ трансформированных ΠΏΠ΅Ρ€Π²ΠΈΡ‡Π½Ρ‹Ρ… Ρ„Π΅Ρ‚Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… фибробластов (Schnieke et al., 1997). Из ΡˆΠ΅ΡΡ‚ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… трансгСнных ягнят ΠΏΡΡ‚ΡŒ оказалось ТизнСспособными. Π‘Ρ‚Π΅ΠΏΠ΅Π½ΡŒ трансгСнности ΠΏΡ€ΠΈ использовании Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ, ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Π° составляла 100%, Π² Ρ‚ΠΎ Π²Ρ€Π΅ΠΌΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Π° ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΈΠ½ΡŠΠ΅ΠΊΡ†ΠΈΠΈ Π² Ρ‚ΠΎΠΉ ΠΆΠ΅ Π»Π°Π±ΠΎΡ€Π°Ρ‚ΠΎΡ€ΠΈΠΈ позволяло ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡ΠΈΡ‚ΡŒ лишь 4,35% трансгСнных ΠΏΠΎΡ‚ΠΎΠΌΠΊΠΎΠ² ΠΎΡ‚ Ρ‡ΠΈΡΠ»Π° Ρ€ΠΎΠ΄ΠΈΠ²ΡˆΠΈΡ…ΡΡ ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡ‚Π½Ρ‹Ρ…. Для получСния ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ трансгСнного ягнСнка ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΎΠΌ пСрСсадки ядСр Ρ‚Ρ€Π΅Π±ΠΎΠ²Π°Π»ΠΎΡΡŒ 20,8 ΠΎΠ²Π΅Ρ†, Π² Ρ‚ΠΎ Π²Ρ€Π΅ΠΌΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΡ€ΠΈ использовании ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Π° ΠΏΡ€ΠΎΠ½ΡƒΠΊΠ»Π΅Π°Ρ€Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΡŠΠ΅ΠΊΡ†ΠΈΠΈ — 51,4 ΠΎΠ²Ρ†Ρ‹ [Schnieke et at., 1997]. Как ΠΈ ΠΏΡ€ΠΈ использовании ЭБК, Π΄Π°Π½Π½Ρ‹ΠΉ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ позволяСт ΠΏΡ€ΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ‚ΡŒ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· ΠΈΠ½Ρ‚Π΅Π³Ρ€Π°Ρ†ΠΈΠΈ Π² ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΡƒΡ€Π΅ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ, Π° Ρ‚Π°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΎΡΡƒΡ‰Π΅ΡΡ‚Π²Π»ΡΡ‚ΡŒ Ρ†Π΅Π»Π΅Π½Π°ΠΏΡ€Π°Π²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ΅ встраиваниС Π³Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… конструкций Π² ΠΆΠ΅Π»Π°Π΅ΠΌΡ‹Π΅ участки Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ°. ΠšΡ€ΠΎΠΌΠ΅ Ρ‚ΠΎΠ³ΠΎ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΠ΅ΠΌΡ‹Π΅ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹Π΅ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ ΠΊΠ°Ρ€ΠΈΠΎΡ‚ΠΈΠΏΠΈΠ·ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½Ρ‹ Π² ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΡƒΡ€Π΅, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΡ‚ Π·Π°Ρ€Π°Π½Π΅Π΅ ΠΏΡ€Π΅Π΄ΠΎΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»ΡΡ‚ΡŒ ΠΏΠΎΠ» трансгСнных ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡ‚Π½Ρ‹Ρ…. ПослС получСния трансгСнных ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡ‚Π½Ρ‹Ρ… ΠΈΠ· Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹Ρ… Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΉ ΠΈ ΠΎΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ уровня экспрСссии ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ ΠΏΡ€ΠΎΠΈΠ·Π²Π΅Π΄Π΅Π½ ΠΎΡ‚Π±ΠΎΡ€ ΠΆΠ΅Π»Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΎΠ² для ΠΈΡ… Π΄Π°Π»ΡŒΠ½Π΅ΠΉΡˆΠ΅Π³ΠΎ использования Π² ΠΏΠ΅Ρ€Π΅ΡΠ°Π΄ΠΊΠ°Ρ… ядСр.

Π‘Ρ…Π΅ΠΌΠ° получСния трансгСнных ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡ‚Π½Ρ‹Ρ… с ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎ трансформированных ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ.

ΠŸΠΎΠΊΠ°Π·Π°Ρ‚ΡŒ вСсь тСкст
Π—Π°ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡ‚ΡŒ Ρ„ΠΎΡ€ΠΌΡƒ Ρ‚Π΅ΠΊΡƒΡ‰Π΅ΠΉ Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚ΠΎΠΉ