Общие правила отбора, консервирования, транспортировки и хранения материала, предназначенного для микробиологического исследования

Отбор материала. Материал берут с учетом клинических признаков болезни, которые указывают на поражение той или иной системы, патологоанатомической картины при вскрытии (изменения в различных органах — печени, легких, кишечнике и т. д.), а также основываясь на предполагаемом диагнозе, поскольку для каждой инфекции характерна определенная локализация возбудителя в организме.

Материал для исследования берут прижизненно или посмертно (от павших или вынужденно убитых животных). Во всех случаях желательно брать материал от животных, не подвергавшихся лечению антибиотиками, и в максимально короткие после их гибели сроки, так как через 2−3 ч после смерти нормальная микрофлора начинает проникать в органы и ткани. Что затрудняет выделение возбудителя в виде чистой культуры. Чтобы избежать контаминации посторонней микрофлорой, исследуемый материал берут стерильно с использованием стерильного инструмента и посуды для транспортировки.

Трупы мелких животных, а также небольшие трупы павших поросят, ягнят, телят и других, мелких животных лучше посылать в лабораторию целиком в непроницаемой таре.

Паренхиматозные органы и их фрагменты (у крупных животных) берут, соблюдая требования асептики. Каждый орган (фрагмент) помещают в стерильную посуду, транспортируют в нативном виде или консервируют одним из способов.

Трубчатые кости посылают на исследование целыми, с неповрежденными концами и тщательно очищенными от мышц и сухожилий. Кости завертывают в марлю или полотно, смоченные дезинфицирующей жидкостью (5%-ным раствором карболовой кислоты или фенола). Кости можно также посыпать поваленной солью и завернуть в полотно или марлю.

Гной, пунктаты органов, экссудат берут при помощи стерильного ватного тампона, шприца. При взятии содержимого пиром (бурс) в области поражения выстригают шерсть, кожный покров дезинфицируют 70° спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с иглой большого диаметра делают пункцию, отсасывают содержимое гигромы и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Кровь рекомендуют брать при лихорадочных состояниях стерильным шприцем в количестве 15−20 мл. Кровь. А также другие жидкие материалы можно отбирать стерильной пастеровской пипеткой с последующим запаиванием ее кончика.

Кровь, гной, выделения из различных полостей, естественных отверстий и др. можно посылать для микроскопического исследования в виде мазков. Кровь у животных берут из вены ушной раковины или края верхушки уха, у птиц — с поверхности гребня или подкрыльцовой вены. Шерсть на месте взятия крови выстригают или выбривают, кожу тщательно протирают ватными тампонами, смоченными сначала спиртом, а затем эфиром.

Инструменты (иглы, скальпель) должны быть стерильными. Первую каплю удаляют стерильной ватой, (исключение делают при исследовании крови на гемоспоридиозы), а следующую свободно выступившую каплю крови берут быстрым и легким прикосновением к ней поверхностью предметного стекла. Затем стекло быстро поворачивают вверх каплей и удерживают между пальцами левой руки в горизонтальном положении. К левому краю капли прикасаются под углом 45° шлифованным краем другого предметного (или покровного) стекла. Как только капля равномерно распределится по ребру этого стекла, им быстро проводят по поверхности предметного стекла слева направо, не доводя до края на 0,5—1,0 см. Ширина мазков должна быть уже предметного стекла. Для каждого нового мазка берут, свежую каплю крови. Готовые мазки крови высушивают на воздухе. Не рекомендуется подсушивать их над пламенем или на солнце.

Правильно приготовленные мазки крови должны быть тонкими, равномерными и достаточной длины. На высушенных мазках и отпечатках острым предметом надписывают номер или кличку животного и дату приготовления.

Мазки из тканей, гноя, органов и различных выделений готовят путем размазывания материала на предметном стекле стерильной палочкой или ребром другого предметного стекла до тонкого слоя. Частицы органов плотной консистенции, твердые узелки, а также вязкий материал целесообразно заключить между двумя предметными стеклами. Их разъединяют после растирания помещенного между ними материала стекла в противоположные стороны в горизонтальном направлении, в результате чего получают два довольно тонких мажа. Иногда получают так называемые препараты-отпечатки. Для этого вырезанный острым скальпелем кусочек органа захватывают пинцетом и свободной поверхностью кусочка делают на стекле несколько тонких отпечатков.

Моча: наружные половые органы обмывают, ополаскивают стерильным физиологическим раствором, осушают стерильным марлевым тампоном. Первую порцию мочи не берут, последующую в необходимом количестве набирают в стерильную посуду.

Мокрота: собирают до приема корма. Из трахеи берут при помощи стерильного трахеотубуса и стерильного ватного тампона на проволоке. При глубоком (до бифуркации) введении тампона возникает кашель и удается получить бронхиальную слизь. Тампон с материалом помещают в пробирку со стерильным раствором. При взятии материала из носоглотки используют специальные приборы, носоглоточные тампоны на изогнутой проволоке, носовые ватно-марлевые тампоны.

Секрет молочной железы: сосок обмывают водой, обрабатывают 70? этанолом, ополаскивают стерильным физиологическим раствором. Первую порцию секрета сцеживают и удаляют. Из каждой доли вымени берут последние порции молока по 10—15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками. У овец и коз пробы молока берут путем пункции цистерны вымени. Для этого животное фиксируют в боковом положении, вымя у основания соска протирают 70° спиртом и смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска, и после попадания иглы в цистерну (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Спинномозговая жидкость: обычно берут при наличии менингоэнцефалитического синдрома путем пункции.

Кишечник: если исследуют содержимое кишечника, то пересылают отдельные отрезки кишечника, перевязанные на концах лигатурами. В остальных случаях интересующие отрезки кишечника освобождают от содержимого, промывают стерильной водой и помещают в банку со стерильным 30%-м водным раствором глицерина или насыщенным раствором хлорида натрия. Объем консервирующей жидкости должен превышать объем взятого материала в 4—5 раз. Кишечник отправляют в лабораторию вместе с регионарными лимфатическими узлами.

Фекалии берут стерильными ватными или ватно-марлевыми ректальными тампонами, которые вводят на 8−10 см в прямую кишку, а затем помещают в стерильную пробирку. Если нет возможности сразу сделать посев, используют консервирующие смеси. В противном случае нарушается исходное количественное соотношение микробных видов, и размножение некоторых бактерий может привести к инактивации искомого возбудителя.

От трупов животных кал можно послать в отрезке невскрытого кишечника, завязанного с обоих концов. Кал в лабораторию должен быть доставлен не позднее 24 ч после его взятия.

Кожа. Для исследования участков кожи берут наиболее пораженные кусочки ее размером 10X10 см и посылают в стерильной, герметически закупоренной посуде.

Кровь для серологического исследования у КРС, овец, лошадей, верблюдов, оленей, овец и коз берут из яремной вены в верхней трети шеи в стерильные бактериологические пробирки, у свиней — из хвостовой, передней краниальной вен или глазного синуса, у птиц — из подкрыльцовой вены, у кроликов — из краевой ушной вены, кровь у лисиц и песцов берут из бедренной вены; у норок — путем отсечения подушечки среднего пальца задней лапы или кончика хвоста.

Иглы перед взятием крови обязательно стерилизуют кипячением. Шерсть на месте взятия крови тщательно выстригают, а кожу дезинфицируют спиртом или эфиром, можно и 3%-ным раствором карболовой кислоты. Нужно следить, чтобы кровь стекала в пробирку струей, а не каплями. Кровь, взятая каплями и вспененная, скорее гемолизируетея и часто дает неправильные результаты при исследовании. Не следует допускать, чтобы кровь попадала на землю. Для этого надо пользоваться баночкой с дезинфицирующей жидкостью, куда опускают первую порцию крови.

Брать кровь для получения сыворотки надо по возможности утром, до кормления животных. Для серологического исследования берут по 7—10 мл крови от крупного рогатого скота, лошадей, овец, свиней; от пушных зверей и птиц — по 1—2 мл.

Сыворотку крови получают методом отстоя. Для этого пробирки с кровью необходимо выдержать до формирования сгустка в тепле (1,5−2 ч), затем для отделения от стенок пробирки обвести сгусток чистой стеклянной палочкой или спицей. Для отстаивания сыворотки пробирки с кровью помещают в холодильник при 4−6?С на 18−20 ч. После ретракции сгустка сыворотку крови переливают в серологические пробирки с резиновыми пробками. При необходимости сыворотку крови консервируют, добавляя в пробирку несколько крупинок борной кислоты, тиомерсал (конечное разведение 1:10 000), 5%-й фенол (1 капля на 1 мл сыворотки при постоянном помешивании), или замораживают. При необходимости сыворотки можно высушивать. Делается это следующим образом. Сыворотку (0,4 мл) наносят на фильтровальную бумагу (5×5 см) и выдерживают при рассеянном свете до полного высыхания. На каждом листе с сывороткой делают соответствующие записи простым карандашом, завертывают в пергаментную бумагу (каждую пробу отдельно), упаковывают в конверт и в таком виде отсылают в лабораторию, где каждую пробу сухой сыворотки помещают в пробирку с 2 мл физраствора. Термостатируют 6—10 ч или выдерживают при комнатной температуре 24 ч, а затем исследуют. Сухие сыворотки сохраняют антигенные свойства 40—130 дней. Сыворотки, консервированные фенолом или борной кислотой, пригодны для исследования в течение 30 дней; замороженные сыворотки — в течение 3 дней после однократного оттаивания. Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки исследованию не подлежат. На каждой пробе сыворотки указывают ее номер или кличку животного, или фамилию владельца животного. Пробы направляют с описью в двух экземплярах.

Консервирование, транспортировка и хранение материала. Материал помещают в стерильную стеклянную посуду (пробирки, флаконы, банки и т. д.), закупоривают.

При подозрении на особо опасные инфекции сосуды с материалом помещают в герметичный металлический пенал, который опечатывают.

Транспортировку и хранение материала до исследования проводят таким образом, чтобы предотвратить размножение сопутствующей микрофлоры и инактивацию искомого микроорганизма. С этой целью исследуемый материал (кусочки органов) помещают в стерильную смесь равных объемов глицерина и физиологического раствора и помещают в термос, содержащий: 1) снег или лед и поваренную соль (в соотношении 3:1), температура смеси -15 — -20?С; 2) равные части сухого льда и этанола, температура смеси около -70?С.

Для консервирования материала, содержащего энтеробактерии. Используют смеси, в которых исследуемый материал должен составлять 1/3 общего объема.

Глицериновая смесь: глицерин — 500 мл, физиологический раствор — 1000 мл, рН смеси доводят до 7,8−8,0 добавлением 20%-ного раствора гидрофосфата калия. Смесь стерилизуют дробно, текучим паром.

Фосфатная буферная смесь: дистиллированная вода — 1000 мл, дигидрофосфат калия — 0,45 г, гидрофосфат калия — 5,34 г. Стерилизуют при 121? С 20 мин.

Для энтеробактерий используют также накопительные среды (селенитовая, магниевая, желчный бульон), которые должны составлять 4/5 общего объема. Независимо от способа консервирования фекалии транспортируют и сохраняют до посева при 2−6 ?С.

Трупы мелких животных, части трупов животных и отдельные органы в свежем (нефиксированном) виде отправляют для исследования в лабораторию только с нарочным. Посылаемый материал, особенно от животных, подозрительных по заболеванию инфекционной болезнью, должен быть тщательно упакован в плотный деревянный или металлический ящик, чтобы предупредить возможность рассеивания инфекции в пути. Перед упаковкой материал необходимо завернуть в ткань или мешковину, смоченную дезинфицирующим раствором (фенольный креолин, известковое молоко), и плотно уложить в ящик, чтобы не болтался при пересылке почтой стеклянной посуды, в которой заключен посылочный материал с подозрением на наличие опасных болезней (сап, сибирская язва, эмфизематозный карбункул, бруцеллез, туляремия, перипневмония крупного рогатого скота, чума крупного рогатого скота, чума свиней, псевдочума птиц, ящур, бешенство), обязательно упаковывают в металлическую коробку, которую запаивают, пломбируют или опечатывают, а затем упаковывают в деревянный ящик.

На лицевой стороне посылки вверху должна быть надпись «Осторожно — стекло» и «Верх».

Если такой материал доставляют с нарочным, можно отправлять его в стеклянной, герметически закупоренной посуде, без металлической коробки, но в ящике.

На взятый патологический материал составляют сопроводительный документ. Если при вскрытии посылки в лаборатории будут установлены несоответствие сопроводительному документу или парча патологического материала, то обязательно составляют акт, копию которого отправляют ветеринарному врачу, направившему материал в лабораторию.

В сопроводительном документе указывают: название и адрес хозяйства, фамилию ветеринарного работника, направляющего материал, вид животного, от которого материал получен, характер материала, на какую инфекцию необходимо исследовать. Кроме того, прилагают протокол патологоанатомического вскрытия и описание клинико-эпизоотологических данных.

Поступивший в лабораторию неконсервированный материал можно хранить при температуре 4? С 1−2 сут; консервированный в 50%-ном растворе глицерина (кусочки органов) — насколько недель; для длительного хранения материал замораживают при -15 — -20?С.