Выявление маркеров гепатита В, С и кори при обследовании пациентов ККБ №1

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Кафедра генетики, микробиологии и биотехнологии ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА БАКАЛАВРА ВЫЯВЛЕНИЕМАРКЕРОВ ГЕПАТИТА В, С и КОРИ ПРИ ОБСЛЕДОВАНИИ ПАЦИЕНТОВ ККБ№ 1

Работу выполнила Масютко А.А.

Краснодар 2015

Содержание Введение

1. Аналитический обзор

1.1 Вирусный гепатит В

1.1.1 Эпидемиология вирусного гепатита В

1.1.2 Маркеры вирусного гепатита В

1.2 Вирусный гепатит С

1.2.1 Эпидемиология вирусного гепатита С

1.2.2 Маркеры вирусного гепатита С

1.3 Вирус кори

1.3.1 Эпидемиология вируса кори

1.3.2 Диагностика вируса кори

2. Материал и методы исследований

2.1 Объект исследования

2.2 Тест системы для выявления антител и антигенов

2.3 Состав набора ИФА

2.4 Схема анализ

2.4.1 Выявление HBsAg

2.4.2 Выявление HCV

2.4.3 Выявление антител к вирусу кори

2.5 Учёт результатов

3. Выявление маркеров гепатита В, С и кори при обследовании пациентов ККБ№ 1

3.1 Выявление маркеров гепатита В и С

3.2 Выявление антител к вирусу кори

Заключение

Список использованных источников

Введение

В структуре гепатитов — поражений печени с признаками воспаления, проявляющихся как самостоятельное заболевание или как компонент генерализованного патологического процесса, вирусные гепатиты занимают ведущее место. Острые и хронические вирусные гепатиты представляют собой одну из основных групп инфекционных болезней: будучи распространены повсеместно они уступают в показателях заболеваемости лишь острым респираторным вирусным инфекциям.

В сопоставлении с другими группами инфекционных болезней вирусные гепатиты — область, в которой за последние 25 лет имеются наиболее очевидные достижения и продолжаются непрерывные открытия.

Вирусные гепатиты представляют собой серьёзную социально-экономическую проблему здравоохранения ввиду их широкого распространения, преимущественно хронического течения с исходом в цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному. По данным Всемирной организации здравоохранения более 1/3 населения мира инфицированы вирусом гепатита В. От патологии, связанной с вирусом гепатита В, ежегодно умирают около 2 млн. человек. Более 500 млн. человек в мире страдают хронической HCV-инфекцией.

По широте распространения, уровню заболеваемости, тяжести течения и частоте развития хронических форм, причиняемому экономическому ущербу эти типы вирусных гепатитов (В и С) занимают в России одно из ведущих мест в инфекционной патологии человека.

В современный период проявления эпидемического процесса вирусного гепатита В характеризуются такими особенностями, каких ранее не знала эпидемиология этой инфекции: высокая интенсивность эпидемического процесса в сочетании с резким преобладанием скрытых форм инфекции, хрониогенными и канцерогенными способностями вируса.

Несмотря на интенсивное изучение вирусного гепатита С, до сих пор не удалось установить причину частого развития хронической формы инфекции, выявить особенности иммунного ответа, обуславливающие естественную элиминацию вируса в острой фазе инфекции, а также создать профилактическую вакцину. Сходство по клинической картине всех вирусных гепатитов на начальных этапах делает проблему этиологической расшифровки данного поражения печени чрезвычайно важной. На сегодняшний день в её решении всё большее значение приобретает лабораторная диагностика, так как она занимает центральное место в подтверждении диагноза.

Корь является крайне заразной тяжелой болезнью вирусного происхождения. По оценкам, в 1980 году, до широкого распространения вакцинации, произошло 2,6 миллиона случаев смерти от кори. По оценкам ВОЗ, в 2013 году от кори умерло 145 700 человек. Несмотря на успехи борьбы с корью, до настоящего времени в мире ежегодно заболевают около 30 млн. чел. На долю кори приходится 4% общего числа смертей детей первых 4 лет жизни, а смертность в группе лиц с иммунодефицитами достигает 25%.

Целью данной работы является выявление маркеров гепатита В, С и кори при обследовании пациентов разных отделений ККБ № 1.

Задачи:

— выявить маркеры вирусных гепатитов В, С и маркеры вируса кори у пациентов ККБ № 1;

— проанализировать распространение HBsAg, анти-HCV по районам Краснодарского края, а так же проследить динамику их встречаемости по отделениям ККБ № 1;

— рассмотреть распределение выявленных маркеров по возрастным категориям и половой принадлежности.

1. Аналитический обзор

1.1 Вирусный гепатит В

Гепатит В (ГВ) является одним из самых распространенных и опасных вирусных инфекционных заболеваний человека, что обусловлено высокой устойчивостью возбудителя во внешней среде и широким спектром клинико-эпидемиологических особенностей. Истинная распространенность гепатита В значительно превышает регистрируемую заболеваемость. Большое число лиц, инфицированных вирусом ГВ, становятся хроническими носителями этого вируса и резервуаром инфекции, иногда не подозревая об этом. ГВ опасен не только тяжестью течения, высокой летальностью, но и развитием хронических форм с переходом в цирроз и первичную карциному печени, особенно у лиц, которые были инфицированы в раннем детстве.

Россия относится к регионам с высоким уровнем распространенности ГВ, что представляет реальную угрозу для здоровья населения. В конце 90-х годов наблюдался выраженный подъём заболеваемости ГВ, при этом неуклонно возрастало число носителей возбудителя. В последние годы существенно изменилась возрастная структура заболевших ГВ, среди которых от 70 до 80% составляют лица в возрасте от 15 до 29 лет, что обусловлено парентеральным употреблением наркотических веществ.

Первые сведения о HBV были получены B. Blumberg (1963 г.) и D. Dane и соавторами (1970), которые описали соответственно австралийский антиген и сам вирион HBV, получивший название частиц Дейна, а в 1971 г. J. Almedia и соавторы расшифровали его структуру, показали наличие внутренней и внешней оболочек.

Возбудитель гепатита В человека — представитель самостоятельного семейства гепаднавирусов (Hepadnaviridae). Вирус гепатита В (частица Дейна) имеет сферическую форму, диаметр — 42 нм. Геном ВГВ представлен двуцепочечной ДНК, содержащей около 3 200 пар нуклеиновых оснований. В состав вириона входит фермент ДНК-полимераза, который вместе с геномом ВГВ и белком образуют ядро частицы Дейна диаметром 28 нм.

ВГВ во многом уникален. Его геном представлен наименьшей у всех ныне идентифицированных ДНК-содержащих вирусов молекулой ДНК. Установлено, что вирусная ДНК может интегрироваться в ДНК гепатоцитов. Ранее считалось, что синтез ВГВ происходит только в гепатоцитах. Теперь доказано, что, хотя они и являются главной фабрикой ВГВ, вирусные ДНК и белки можно обнаружить и в клетках почек, селезенки, поджелудочной железы, кожи, костного мозга и крови. ВГВ может быть обнаружен в сыворотке крови и цитоплазме гепатоцитов больных острым и хроническим ГВ, а также у «здоровых» вирусоносителей. В настоящее время можно также считать доказанной роль ВГВ в этиологии первичного рака печени.

Иммунный ответ при ГВ имеет характерные особенности, обусловленные тем, что реакция со стороны иммунной системы на инфицирование ВГВ является не иммунопротективной, а иммунопатологической. Это означает, что сам вирус клетки печени не разрушает, а лизис инфицированных ВГВ гепатоцитов происходит за счет атаки цитотоксических Т-клеток иммунной системы. Таким образом, подавление репликативной активности вируса в организме человека достигается ценой гибели собственных инфицированных печеночных клеток.

Широко известна обратная зависимость угрозы хронизации инфекции от тяжести течения острой фазы ГВ. При адекватном иммунном ответе массивная гибель инфицированных клеток приводит к тяжелому течению болезни, но вместе с тем способствует более полной элиминации вируса, исключающей вероятность хронизации. При слабом иммунном ответе цитолиз вируссодержащих гепатоцитов происходит недостаточно активно, и наблюдается легкое или стертое течение острой фазы ГВ. Печень от вируса «очищается» не полностью, поэтому инфекционный процесс приобретает затяжное течение с длительным персистированием ВГВ и угрозой хронизации. Вероятность трансформации острого ГВ в хронический намного выше у лиц с иммунодефицитными состояниями.

1.1.1 Эпидемиология вирусного гепатита В ГВ передается через кровь и контактным, преимущественно половым путем. Большому риску подвергаются медики, имеющие частые контакты с кровью. Вирус может передаваться от матери к ребенку во время беременности или непосредственно при родах. До 80% новых случаев заражения ГВ связано с внутривенным употреблением наркотиков. Реализации путей передачи инфекции способствует продолжительная и интенсивная вирусемия у источников инфекции, часто не имеющих внешних признаков болезни. При ГВ отсутствуют сезонные подъемы заболеваемости. Лица, перенесшие гепатит В и имеющие антитела к поверхностному антигену вируса (анти-HBs), повторно не заражаются.

ВГВ высокоустойчив к внешним воздействиям. В условиях комнатной температуры вирус сохраняется 3 месяца, в холодильнике 6 мес., в замороженном виде — 15−20 лет, в высушенной плазме — 25 лет. Вирус теряет инфекционность при автоклавировании при температуре 120 °C через 45 мин, при стерилизации сухим паром — в течение 60 мин при 180 °C или при кипячении в течение 30 минут.

Показателем широты распространения ВГВ служит частота выявления поверхностного антигена ВГВ (HBsAg) и антител к cor-антигену ВГВ. Выделяют регионы с низкой (менее 2% населения) (Северная, Западная, Центральная Европа, Австралия, Северная Америка), со средней (2−8% населения) (Восточная Европа, Россия и др.) и высокой (8−20% населения) частотой носительства HBsAg (Юго-Восточная Азия, тропическая Африка и др.).

В структуре внутрибольничных инфекций на вирусные гепатиты приходится до 7% от общего уровня заболеваемости. Ведущая роль в инфицировании больных и сотрудников лечебно-профилактических учреждений у парентеральных вирусов гепатита. Установлено, что на фоне снижения заболеваемости острыми формами гепатитов В и С у медперсонала регистрируются высокие показатели заболеваемости хроническими формами гепатитов.

За январь-сентябрь 2013 г. года по сравнению с аналогичным периодом 2012 г. в Российской Федерации наиболее существенно снизились показатели заболеваемости острым гепатитом В (на 9,1%).

В эндемических по гепатиту В регионах заболеваемость у мужчин в несколько раз выше, чем у женщин. Риск развития ГВ в течение всей жизни в этих районах оценивается как 50% у мужчин и 20% у женщин.

В 2013 г. в Краснодарском крае зарегистрировано 42 случая острого гепатита «В» (наличие маркера HBsAg), показатели заболеваемости на 100 тыс. населения составили соответственно 0,8 против 1,4 в 2010 г. и 0,9 в 2011 г. Заболеваемость среди детей не зарегистрирована. Несмотря на общую тенденцию к снижению заболеваемости ГВ, в Калининском (1,9), Брюховецком (1,8), Ейском (1,4), Геленджике (1,0) уровень заболеваемости остается достаточно высоким, заболевания ГВ в 2013 г. регистрировались только на 7 территориях края. Уровень «носительства» вируса гепатита «В» среди населения в 2013 г. снизился по сравнению с 2010 г. на 34,4% и с 2011 г. — на 12,8% и составил на 100 тыс. населения 9,1 против 13,9 в 2010 г. и 10,4 — в 2011 г. Хронический вирусный гепатит «В» составляет 19,8% (в 2010 г. и 2011 г. по 20,9%). Уровни заболеваемости хроническими гепатитами резко отличаются по территориям, что в немалой степени зависит от качества их диагностики и полноты регистрации этой патологии. Наибольшая заболеваемость хроническими вирусными гепатитами зарегистрирована в гг. Горячий Ключ (100,8), Краснодар (102,4), Белоглинском (223,3), Выселковском (145,9), Мостовском (91,4), Новопокровском (111,8), Тбилисском (419,4) районах.

К эпидемиологическим показателям можно отнести исследования, проведённые в одном из регионов Тайвани: там зафиксирована тенденция повышения индекса массы тела у носителей HBsAg [Chu Chia-Ming, Lin Deng-Yn, Liaw Yun-Fan, 2013].

1.1.2 Маркеры вирусного гепатита В В организме больного ГВ могут быть обнаружены вирусные антигены HBsAg и HBeAg, а также антитела к ним и НВсоге-белку: анти-НВсоге, анти-НВе, анти-HBs. Данные антигены и антитела в совокупности представляют комплекс специфических маркеров ВГВ, который находится в динамическом изменении и отражает вирусную репликацию и иммунную реакцию пациента. Комплексное определение маркеров позволяет правильно установить стадию инфекции ВГВ и прогнозировать ее дальнейшее развитие.

HBsAg — основной серологический маркер ГВ (австралийский антиген). При остром гепатите HBsAg может быть выявлен в крови обследуемых в инкубационный период ГВ и в первые 4−6 недель клинического периода. Присутствие HBsAg более 6 мес. (по мнению некоторых авторов, более 1 года) рассматривается как фактор перехода болезни в хроническую стадию. Контроль донорской крови на наличие HBsAg является обязательным практически во всех странах мира. Однако, использование большинства иммуноферментных тестов для определения этого маркера не позволяет со 100%-й вероятностью пользование этого набора в лабораторной практике позволит существенно повысить безопасность донорской крови в отношении гепатита В за счет значительного сокращения серонегативного периода инфекции, а также корректировать лечебные мероприятия при микст-инфекциях и уточнить диагноз ГВ в некоторых сложных случаях.

Эффективных специфических средств лечения ГВ нет. Единственным действенным способом борьбы с ним является массовая профилактическая вакцинация населения. Благодаря внедрению национальной программы вакцинации, начиная с 2001 года наметилась некоторая тенденция к снижению заболеваемости ГВ. Повсеместное использование одноразового медицинского инструментария, исследование образцов сывороток крови на маркеры ГВ с помощью высокочувствительных методов третьего поколения также вносят существенный вклад в дело борьбы с ГВ [Обрядина, 2006].

Однако, несмотря на принимаемые меры, эпидемическая ситуация с ГВ остается достаточно серьезной и требует постоянного расширения и совершенствования профилактических мероприятий.

1.2 Вирусный гепатит С

Гепатит С является инфекцией, возбудитель которой распространяется среди людей почти исключительно путем абиогенной «кровяной» трансмиссии. Вирусом гепатита С инфицировано около 3% населения Земного шара, и фактически речь идет о пандемии, которая по масштабу в 5 раз превосходит зараженность вирусом СПИДа. После резкого снижения гемотрансфузионного гепатита С (благодаря антивирусному контролю донорской крови) инфицированность поддерживается за счет парентеральных инъекций наркотиков и (в меньшей степени) других процедур, связанных с повреждением кожи и слизистых оболочек. HCV-инфекция относится к индикаторам социального и медицинского благополучия общества.

HCV был выделен М. Houghton и соавторами в 1989 г. Геном HCV представлен одноцепочечной РНК, которая кодирует три структурных и шесть неструктурных белков вируса. К структурным относятся Nконцевые белки — нуклеокапсидный белок (с — core) и гликопротеины оболочки El, Е2, к неструктурным относятся шесть Сконцевых белков с ферментативной активностью [Алгоритм специфической лабораторной…, 2000].

HCV — мелкий сферический вирус (30−60 нм), имеющий белково-липидную оболочку, нуклеокапсид. Вирус гепатита С относится к семейству Flaviviridae к роду Hepacivirus. Отличительной особенность генома HCV является значительное разнообразие генетических вариаций. В настоящее время выделяют 6 генотипов и более 100 субтипов. Генотипы 1а, 1 в, 2а, 2с и За составляют более 90% всех HCV-изолятов, полученных в странах мира. На территории России преобладают 1 В и За генотип. 4-й генотип чаще выявляется в Египте, а 5-й и 6-й генотипы — в Южной Африке и Юго-Восточной Азии.

Иммунодиагностика ВГС имеет свои специфические черты. Поскольку ВГС не удавалось получать в препаративных количествах, тест-системы для определения антител были созданы лишь после клонирования ДНК-копии РНК-генома в фаговом векторе на основе синтетических антигенов. В тест-системах последнего поколения используются синтетические антигены ВГС, кодируемые генами структурных и неструктурных белков.

1.2.1 Эпидемиология вирусного гепатита С Формально эпидемиология гепатита С достаточно проста: вирус передается в основном при контакте с зараженной кровью и ее продуктами. По ретроспективным оценкам анти-HCV антитела обнаруживаются в большинстве образцов донорской крови, переливание которой осложнилось гепатитом. У гемофиликов, получавших в прошлом многократные инъекции антигемофильных препаратов, антитела к HCV выявляются в 50−80% случаев. Высокий процент инфицированности (в 20 и более раз выше, чем у здоровых) имеют больные на постоянном гемодиализе. Выбраковка доноров на основе определения маркеров вирусных гепатитов, ВИЧ-инфекции и обеззараживание препаратов крови резко сократили посттрансфузионное HCV-инфицирование. Вероятность заражения работников здравоохранения от случайных уколов шприцевыми иглами после инъекций HCVинфицированным больным по разным данным колеблется от 0 до 10%.

Основную группу риска составляют лица, употребляющие парентеральные наркотики. Они играют ведущую роль в современной эпидемиологии гепатита С, определяя неодинаковую интенсивность эпидемического процесса в разных возрастно-половых и социальных категориях [Risk factors…, 2013]. Повышенная вероятность заражения HCV при многократном использовании контаминированных вируссодержащей кровью игл и шприцев с целью внутривенного введения психотропных препаратов. Максимальный процент инфицирования наблюдается среди подростков и молодых людей 18−29 лет, преимущественно мужского пола.

Вместе с тем в 20−40% случаев причины заражения HCV остаются нераскрытыми, по крайней мере, их не удается связать с известными факторами риска. Это говорит о возможности распространения вируса иными путями. Один из активно обсуждавшихся механизмов — половые контакты. Такая возможность реальна, но маловероятна. Среди постоянных половых партнеров, один из которых хронически инфицирован HCV, риск заражения не превышает 1% в год.

Передача HCV от матерей тоже редкое явление: вероятность контаминации плода и новорожденного инфицированными женщинами составляет 1−5%. HCV содержится в слюне, но его концентрация скорее всего недостаточна для заражения в обычных бытовых ситуациях.

Продолжает оставаться напряженной эпидемиологическая обстановка по заболеваемости острым гепатитом «С». В 2013 г. заболеваемость острым гепатитом «С» снизилась по сравнению с 2010 г. на 34,1% и с 2011 г. — на 3,3%. Показатель заболеваемости в 2013 году составил 0,6 против 0,9 на 100 тыс. населения в 2010 г. и 0,6 — в 2011 г. Зарегистрировано 30 случаев ГС, в т. ч. у детей до 17 лет — 1 случай. В Щербиновском (2,7), Анапа (2,7), Ново-Покровском (2,6), Краснодаре (1,8), Динском (1,7), Тихорецком (1,6) районах заболеваемость ГС превышала среднекраевой показатель, заболевания ГС в 2013 г. регистрировались на 9 территориях края. Основной удельный вес в структуре заболевших ОГС, как и при ОГВ, составляют взрослые и пожилые люди — 96,7%. Заболеваемость ОГС у детей в 2010;2011 гг. не регистрировалась. Показатель заболеваемости детей в 2013 г. составил 0,1 на 100 тыс. детей. В общей структуре хронических вирусных гепатитов на долю хронического вирусного гепатита «С» приходится 79,9%. В 2013 г. показатель заболеваемости ХГС в 4 раза превысил показатель заболеваемости ХГВ и составил 34,6 на 100 тыс. населения при показателе ХГВ — 8,6 (в 2010 г. — 36,7 и 9,8, в 2011 г. — 30,9 и 8,3 соответственно).

Половое соотношение при HCV-инфекции равно 2:1 (преобладают мужчины) и рак диагностируется, как правило, на 5-ом десятилетии [Эпидемиология, молекулярная биология…, 2013]. Социальный портрет больного гепатитом С в Краснодарском крае: мужчина в возрасте от 28 до 48 лет, городской житель, служащий или безработный.

1.2.2 Маркеры вируса гепатита С Установление диагноза HCV-инфекция осуществляется с помощью серологических маркеров инфицирования, которые в течение инфекционного процесса могут исчезать и появляться вновь. Наиболее ранним маркером инфекции является PHK-HCV, который выявляется на 7−21-й день от момента инфицирования. Уровень PHK-HCV при острой инфекции практически постоянный и составляет 105— 107 копий/мл. При хронической инфекции уровни PHK-HCV колеблются в значительных пределах от 5×10⁴ до 5×10⁶ копий/мл, но у конкретного пациента уровни РНК относительно стабильны. Диагноз хронической инфекции на основании выявления PHK-HCV ставится в том случае, если реакция ПЦР в сыворотке крови положительная в течение 6 месяцев. Выявление PHK-HCV является основанием для установки диагноза гепатита С в случаях серонегативности. Положительная реакция PHK-HCV указывает только на активацию процесса репликации вируса, которая может наблюдаться как при острой, так и при хронической форме инфекции [Излечим ли хронический гепатит С?, 2009].

Выявление PHK-HCV считается «золотым» стандартом в диагностике гепатита С. Наиболее широко используется классический вариант полимеразной цепной реакции (ПЦР) после обратной транскрипции HCV-PHK в комплементарную ДНК (кДНК). С ее помощью удается следить за вирусемией, а также судить о присутствии HCV в печени и других тканях.

Анти-HCV выявляются на 20−150-й день (в среднем на 50-й день). Спектр антител может различаться в зависимости от стадии инфекции. В острой фазе антитела к неструктурным белкам определяются позже, чем антитела к структурным белкам. Титры антител в острой фазе могут иметь значения в широких пределах — от 0 до 1:6000. У пациентов в острой фазе гепатита С антитела к структурным белкам вируса обычно определяются через 6−8 недель после инфицирования. Возможные отклонения от интервалов связаны с полученной дозой вируса, способом заражения и состоянием иммунной системы. По данным ВОЗ острая фаза гепатита С продолжается 6 месяцев. Следует помнить, что у определенной категории пациентов при выявлении антител к вирусу гепатита С могут определяться как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты. Уровень ложноположительных ответов на анти-HCV может достигать от 10 до 20% у онкологических больных и пациентов с аутоиммунными заболеваниями, лиц с иммунодефицитными.

Выявление анти-HCV антител проводят при помощи твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) на основе комплекса структурных и неструктурных вирусных пептидов.

В настоящее время абсолютно очевидны серьезные проблемы, которые связаны с данной инфекцией: высокая частота формирования хронических форм, длительное бессимптомное течение, манифестация заболевания на поздних стадиях (цирроз печени), четкая ассоциация с развитием гепатоцеллюлярной карциномы. Но в результате проведения комплекса многоплановых профилактических мероприятий, в том числе в рамках национального приоритетного проекта в сфере здравоохранения, в Российской Федерации заболеваемость острым гепатитом С снижается.

1.3 Вирус кори

Корь — высококонтагиозное острое вирусное заболевание, проявляющееся повышением температуры тела, воспалением слизистых оболочек дыхательных путей и конъюнктивы, этапно появляющейся пятнисто-папулёзной сыпью.

Возбудитель кори был выделен в 1954 году Дж. Эндерсом и Т. Пиблесом и является РНК-содержащим вирусом из семейства парамиксовирусов. Вирус кори типовой вид рода Morbillivirus, содержит нуклеокапсид и липопротеиновую оболочку [Коротяев, Бабичев, 2012]. Белок гемагглютинин вируса кори обладает, по крайней мере, двумя консервативными нейтрализующими эпитопами. Моноантитела, распознающие эти эпитопы, не ингибируют связывание гемагглютинина рецептором. Эти эпитопы играют ключевую роль в ускользании от иммунного ответа, некоторых генотипов вируса кори за счёт модификаций N-связанных углеродных цепей [Functional and structural…, 2013].

Входные ворота в организм: слизистая оболочка верхних дыхательных путей. Размножение вируса происходит в эпителиальных клетках, откуда гематогенным путём он распространяется по всему организму и фиксируется в органах ретикулоэндотелиальной системы с последующим размножением и накоплением.

В патогенезе кори условно можно выделить пять этапов: а) инфицирование и первичная репродукция; б) первичная вирусемия; в) вторичная репродукция в системе мононуклеарных фагоцитов; г) вторичная вирусемия с поражением органов и систем; д) формирование иммунитета и ликвидация патологического процесса [Кузьменко, Овсяннников, Киселёва, 2009]. Вирус кори обладает тропностью к эпителиальным клеткам, оказывает повреждающее действие (пятна Бельского-Филатова-Коплика). При попадании возбудителя в головной мозг может развиться специфический коревой энцефалит. Вирус кори на продолжительный период вызывает специфическую аллергизацию организма, что приводит к атипичному течению инфекции у привитых (через 5−7 лет после вакцинации).

1.3.1 Эпидемиология вируса кори Корь типичный антропоноз. Источник инфекции — больной человек, который контагиозен с последних 1−2 дней инкубационного периода до 4-го дня с момента появления сыпи (в этот период вирус можно выделить из крови и носоглоточных смывов). Больные с иммунодефицитом могут выделять вирус более длительное время. Механизм передачи — капельный, пути передачи — воздушно-капельный, воздушно-пылевой. В связи с малой устойчивостью вируса кори передача инфекции через предметы и третьих лиц невозможна. Восприимчивость к кори можно считать всеобщей (95%).

Восприимчивый контингент — люди любого возраста, не получившие профилактической противокоревой прививки и не болевшие корью, а также вакцинированные лица старших возрастных групп спустя длительный срок после вакцинации, что связанно с падением напряжённости иммунитета.

В целях профилактики проводится активная иммунизация живой вакциной кори в возрасте 1 года. Ревакцинация осуществляется в 6 лет [Кузьменко, Овсяннников, Киселёва, 2009]. Однако показано, что с увеличением возраста рожениц (от 21 до 35 лет), для которых иммунизация против кори очень важна, возрастает число серонегативных к вирусу кори, что указывает на необходимость их ревакцинации перед беременностью, поскольку в группе старше 36 лет значительно уменьшается количество серонегативных, косвенно отражающее их возможное инфицирование к этому возрасту.

Ускоренные мероприятия по иммунизации оказали значительное воздействие на снижение смертности от кори. В 2000;2013 гг. вакцинация от кори предотвратила 15,6 миллиона случаев смерти. Глобальная смертность от кори снизилась на 75% — с 544 200 случаев смерти в 2000 году до 145 700 случаев в 2013 году, большинство из которых дети в возрасте до 5 лет. В Российской Федерации заболеваемость корью в 2013 году по сравнению с предыдущим годом возросла на 10,2%. В целом по стране в 2013 году зарегистрировано свыше 2,3 тыс. случаев кори в 58 субъектах Российской Федерации. В структуре заболевших корью дети до 17 лет составляют 47%, среди взрослого населения около 78% приходится на возрастную группу 20−39 лет. Эпидемический процесс кори протекает в виде выраженных периодических подъемах и спадах заболеваемости, чередующихся каждые 1−2 года [Корь. ВОЗ, 2015].

В 2012 г. в Краснодарском крае осложнилась эпидемиологическая ситуация по кори, что связано с ростом заболеваемости и возобновлением циркуляции эндемичных для ряда стран Европы вирусов кори, а также неблагополучием по кори в странах Азиатского региона, и, как следствие, увеличением числа завозных случаев кори в край. На долю взрослых пришлось 45,7% от числа заболевших, а доля детей составила 54,3%. Дети до 2 лет составили 68% среди всех заболевших детей. Учитывая геополитическое значение Краснодарского края — Зимние Олимпийские игры 2014 года сыграли важную роль в увеличении роста миграции населения, т. е. в регионе произошёл завоз и распространение инфекционных болезней, в частности вируса кори. Так в январе-феврале 2014 года зарегистрировано 136 случаев кори (2,58), в 1,75 раза больше уровня заболеваемости 2013 года. Наибольшее количество случаев выявлено в г. Сочи и г. Краснодаре (72 и 16 соответственно).

1.3.2 Диагностика вируса кори В настоящее время в нашей стране, как и в большинстве стран мира, для диагностики кори, в основном, используют иммуноферментный анализ (ИФА), который отвечает всем необходимым требованиям диагностики, дает возможность получать объективные результаты, методически прост, что позволяет его использовать в любой лаборатории и пригоден для проведения широкомасштабных серологических исследований. Для экспресс-диагностики кори могут быть реализованы два подхода: классический, основанный на обнаружении вирус специфических антител класса М, являющихся маркером текущей инфекции, и второй метод, позволяющий дифференцировать острую инфекцию от инфекции, перенесенной в прошлом, основанный на определении авидности вирус специфических антител класса G [Алтынбекова, Кусельман, Яковенко, 1984]. Для обнаружение антигенов кори используют клетки отделяемого носоглотки или кожи (из элементов сыпи) методом иммунофлюоресцентной микроскопии (в реакции применяют меченный флюорохромом коревой IgG). Выявление антител к возбудителю кори осуществляется в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), ИФА.

2. Материал и методы исследований Работа была выполнена в июне — июле и сентябре 2014 года, на базе иммунологической лаборатории Краевой клинической больницы № 1 им. проф. С. В. Очаповского. А так же были взяты архивные данные за май, и с августа по октябрь 2014 года.

2.1 Объект исследования

Объектом исследования являлись образцы сывороток крови. Количество образцов обследованных на наличие вирусных гепатитов составило — 16 356. Каждый образец сыворотки исследовался на наличие антител к вирусу гепатита С и выявления поверхностного антигена вируса гепатита В, а также на их подтверждение. Количество сывороток проверенных на наличие иммунитета к вирусу кори составили — 1 254. Образцы были взяты у пациентов разных отделений ККБ№ 1. До проведения анализа кровь проходит стадию центрифугирования и хранится при температуре от 2 до 8 °C не более трёх суток. При необходимости возможно замораживание до минус 20 °C, нельзя использовать сыворотку (плазму), замороженную и размороженную более 3-х раз. Для анализа каждый образец отбирается новым одноразовым наконечником. Образцы, имеющие гемолиз и другие неестественные изменения цвета — не допускаются к анализу, т.к. могут дать ложный положительный результат.

2.2 Тест-системы для выявления антител и антигенов Для проведения анализа были использованы следующие тест-системы: «Тест-система иммуноферментная для выявления антител к вирусу гепатита С» («ИФА-АНТИ-HCV»), «Тест-система иммуноферментная для выявления или подтверждения поверхностного антигена вируса гепатита В, набор диагностический» («ДС-ИФА-HBsAg»), «Тест система-система иммуноферментная для выявления спектра антител к вирусу гепатита С и подтверждения результатов анти-HCV скрининга», «Тест для подтверждения специфичности выявления HBsAg иммуноферментным анализом». Все наборы имеют единого производителя: «Научно-производственное объединение «Диагностические системы», Россия г. Нижний Новгород. Так же была использована «Тест-система иммуноферментная для выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу кори» («ИФА-Корь-IgG»), производства ЗАО «ЭКОлаб», Московская область, город Электрогорск.

2.3 Состав набора ИФА

a) Иммуносорбент — полистироловый разборный планшет с сорбированными в лунках моноклональными антителами, рекомбинантными антигенами;

b) Конъюгат — смесь конъюгатов моноклональных антител, конъюгированных с пероксидазой хрена;

c) Блок-раствор — раствор для рабочего разведения сывороток;

d) Рабочий раствор конъюгата — раствор для разведения конъюгата;

e) К+, К- - контрольный положительный и отрицательный образцы;

f) Промывочный раствор — концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином;

g) Субстратный буферный раствор — цитратный буфер, содержащий раствор водорода перекиси (содержащий лимонную кислоту, ацетат натрия);

h) Хромоген ТМБ — раствор, содержащий 3,3', 5,5'- тетраметилбензидиндегидрохлорид;

i) Стоп-реагент — раствор серной кислоты 0,2 моль/л.

Набор «ДС-ИФА-HBsAg» имеет дополнительно: АНТИ-HBs-МИНУС — козьи антитела, не содержащие антитела к HBsAg, внесённые в сыворотку крови человека, не содержащую HBsAg, антитела к HBsAg, ВИЧ-1,2 и вирусу гепатита С, инактивированную прогреванием и АНТИHBs-ПЛЮС — козьи антитела, содержащие антитела к HBsAg, внесённые в сыворотку крови человека, не содержащую HBsAg, антитела к HBsAg, ВИЧ-1,2 и вирусу гепатита С, инактивированную прогреванием.

Набор «ИФА-Корь-IgG» имеет дополнительно: раствор индикаторный и раствор для разведения образцов (РРО).

Набор комплектуется готовыми реагентами или концентрированными растворами. Имеется цветовая кодировка реагентов. Рабочий промывочный раствор, рабочий раствор конъюгата и субстратная смесь — реагенты, требующие предварительного приготовления. До проведения анализа все реагенты необходимо выдержать около 30 минут при комнатной температуре.

2.4 Схема анализа

Проведение анализа начинается с приготовления иммуносорбента с необходимым количеством стрипов.

2.4.1 Выявление HBsAg

— Внести по 100 мкл К+, К-.

— Внести по 100 мкл исследуемых образцов.

— *Внести по 25 мкл АНТИ-HBs-МИНУС, АНТИHBs-ПЛЮС (для подтверждающего теста).

— Внести по 50 мкл рабочего раствора конъюгата.

— Инкубировать: Процедура 1: 2 часа, 37,0 °C, инкубатор микропланшетный; Процедура 2: 1 час, 42,0 °C, 500 об/мин, термошейкер.

— Промыть планшет рабочим промывочным раствором, не менее 380 мкл, 4 раза.

— Внести по 100 мкл субстратной смеси.

— Инкубировать 20 мин, 18−24°C, в защищённом от света месте или 15 мин, 37,0°C, в защищённом от света месте.

— Внести по 150 мкл стоп-реагента.

— Учёт результатов — 450нм/620−680 нм.

2.4.2 Выявление HCV

— Внести по 100 мкл К+, К-.

— Внести по 30 мкл блок раствора (50 мкл для спектра).

— Внести по 70 мкл исследуемых образцов сывороток (50кл для спектра).

— Инкубировать: Процедура 1: 1час, 37,0 °C, инкубатор микропланшетный;

Процедура 2: 1 час, 37 °C, 500 об/мин, термошейкер (1 час, 37,0 °C, термостат для спектра).

— Промыть планшет рабочим промывочным раствором, не менее 400 мкл, 4 раза.

— Внести по 100 мкл рабочего раствора конъюгата.

— Инкубировать: Процедура 1: 30 мин, 37,0°C, инкубатор микропланшетный; Процедура 2: 20 мин, 37,0 °C, 500 об/мин, термошейкер.

— Промыть планшет рабочим промывочным раствором, не менее 400 мкл, 4 раза.

— Внести по 100 мкл субстратной смеси.

— Инкубировать 20 мин, 18−24 °C, в защищённом от света месте (30мин, 18−24°C в защищённом от света месте для спектра).

— Внести по 150 мкл стоп-реагента (по 50 мкл для спектра)

— Учёт результатов — 450нм/620−680 нм.

2.4.3 Выявление антител к вирусу кори

— Внести в первую лунку — 100 мкл раствора для разведения образцов, в следующие 10 лунок по 100 мкл контролей (по 2 лунки на образец), в оставшиеся лунки — по 100 мкл рабочего разведения исследуемых образцов.

— Инкубировать 30 мин, 21−25 °C.

— Промыть 4 раза промывочным раствором.

— Внести по 100 мкл рабочего раствора конъюгата в каждую лунку.

— Инкубировать 30 мин, 21−25 °C.

— Промыть 4 раза промывочным раствором.

— Внести по 100 мкл индикаторного раствора в каждую лунку.

— Инкубировать 10 мин, 21−25 °C.

— Внести по 100 мкл стоп-реагента.

— Измерить оптическую плотность при 450нм (референс 620−650 нм)

2.5 Учёт результатов Учёт производят спектрометрически при двух длинах волн — 450 нм и при референс-длине волны в диапазоне от 620 до 680 нм. Реакцию учитывают, если среднее значение ОП в лунках с К+ не менее 1,5, а среднее значение ОП в лунках с Кне более 0,2. Положительными считать образцы со значениями ОП превышающими или равными критическому значению ОП. ОП крит. рассчитывается по формуле: ОПкрит. = ср. знач. ОП К- + 0,180 (коэффициент) — всё это для «ИФА-АНТИ-HCV».

Реакцию учитывают, если значение ОП в лунках с К+ не менее 2,0, а среднее значение ОП в лунках с Кне более 0,2. Результаты считать положительными, если значение ОП образца превышает соответствующее критическое значение ОП (крит.) на 20% и более. Формула для ОП крит.: ОПкрит. = ср. знач. ОП К- + 0,200 — для спектра.

Реакцию следует учитывать, если значение ОП в лунках с К+ не менее 0,6, а среднее ОП в лунках с Кне более 0,12. Положительные — образцы со значением ОП, равным или превышающим ОП критическую. Формула: ОПкрит. = ОП Кср. + 0,050 — для «ДС-ИФА-HBsAg».

Сомнительным результатом считается тот, что при проведении начального анализа показал ОПкрит. приближенное к положительному значению, а при подтверждении дал слабоположительную реакцию или вовсе отрицательную.

Для «ИФА-Корь-IgG» исследуемые образцы следует учитывать: как положительные при концентрации иммуноглобулинов класса G более 0,33 МЕ/мл, как отрицательные при концентрации иммуноглобулинов класса G менее 0,27 МЕ/мл, как сомнительные при концентрации иммуноглобулинов класса G от 0,27 до 0,33 МЕ/мл.

3. Выявление маркеров гепатита В, С и кори при обследовании пациентов ККБ№ 1

На базе иммунологической лаборатории Краевой клинической больницы № 1 им. проф. С. В. Очаповского была проведена работа по выявлению маркеров вирусных гепатитов В, С и вируса кори у пациентов разных отделений.

3.1 Выявление маркеров гепатита В и С

За время проведения работы было исследовано 16 356 образцов крови (плазмы), из которых 1400 образцов были исследованы в июне — июле 2014 года, а остальные 14 956 — были взяты из архивных данных за период с мая по октябрь 2014 года. Каждый проверялся на наличие маркеров вирусного гепатита В и С с помощью иммуноферментного анализа.

Иммуносорбент (разборный планшет для ИФА анализа) позволяет проверить на вирусный гепатит 93 пробы одновременно, что значительно ускоряет процесс анализа, т.к. в день число сывороток может превышать количество 250.

Пробы крови отбирали у пациентов разных отделений. Результаты проверки на наличие маркеров приведены в таблице 1.

Таблица 1 — Частота обнаружения HBsAg и анти-HCV у обследованных пациентов разных отделений ККБ№ 1

Как видно из таблицы 1, пробы были взяты в 64 отделениях. Наибольшее количество проб исследовано в следующих отделениях: кардиологии 1 и 2 (739, 738 пробы соответственно), пульмонологии (704), гинекологии (581), неврологии 2 (611), платных отделений ККБ№ 1 и ЦГХ (1760 и 1305 соответственно) и отделений общей хирургии 1 и 2 (965, 661 проб). Так же из таблицы 1 видно, что наибольшая частота встречаемости маркеров вирусного гепатита В наблюдается в краевом медицинском центре (9,5%), в отделении торакальной онкологии (6,8%), в отделении нейрохирургическом (6,25%), в приёмном отделении ККБ№ 1 (7,4%), в отделении абдоминальной онкологии (6,25%). А наибольшая частота встречаемости маркеров гепатита С у пациентов отделений: гастроэнтерологии (29,4%), травматолого-ортопедического (20,8%).

Таблица 2 — Результаты исследований на наличие маркеров вирусных гепатитов В и С за период с мая по октябрь 2014 год

Проводя сравнение по месяцам, которое представлено в таблице 2, можно отметить, что наибольшее количество обследованных отмечено в июле, августе и сентябре — их показатели превысили отметку в 2821 человек. Пациенты с выявленными HBsAg преобладают в июне и августе, а с выявленными анти-HCV — в июле, августе и сентябре.

За период исследований у пациентов, с зафиксированными данными, удалось проследить их географическое распределение. Данные по ситуации с выявленными маркерами вирусного гепатита В приведены ниже, в таблице 3, данные по гепатиту С в таблице 4.

Таблица 3 — Географическая распространённость выявленных маркеров вирусного гепатита В среди пациентов ККБ№ 1

Как видно из таблицы 3, лидирующее место по общему количеству обследованных на гепатит В, занимает город Краснодар — 369 человек (50,2%). Положительный результат (т.е. наличие маркеров вирусного гепатита В) составил 4,7% от числа обследованных на ВГВ (35 человек).

Сыворотки пациентов (в количестве 665 образцов) из Белоглинского, Отрадненского, Курганинского, Динского, Гулькевичского, Новопокровского, Щербиновского, Ейского, Абинского, Мостовского, Каневского, Анапского, Павловского, Калининского, Темрюкского, Тбилисского, Новокубанского, Староминского районов тоже были исследованы на наличие маркеров ВГВ, но дали отрицательный результат. Наибольший процент выявленных маркеров ВГВ наблюдается в районах: в Апшеронском (из 25 человек — 4 человека положительны по ВГВ (16%), в Выселковском (из 16 человек — 2 дали положительный результат по ВГВ (12,5%), в Кущёвском районе (из 6 человек положительный результат дал 1 человек (16%).

Районное распространение изменилось по сравнению с 2013 годом. Согласно литературным данным [О состоянии инфекционной заболеваемости…, 2013] районы: Динской, Новопокровский, Щербиновский, Мостовской, Анапский и Тбилисский показывали наибольшие результаты выявленных маркеров ВГВ в 2013 году, что отличается от полученных нами данных за время проведения работы в 2014 году.

Таблица 4 — Географическая распространённость маркеров вирусного гепатита С среди пациентов ККБ№ 1

Помимо представленных, в таблице 4, районов и городов, так же были обследованы на наличие маркеров ВГС пациенты с других районов: Успенский, Лабинский, Усть-Лабинский, Славянский, Кавказский, Ленинградский, Кущёвский и городов: Ессентуки, Геленджик, Горячий Ключ. Общее количество их составило 412 человека — у этих пациентов не было выявлено маркеров вирусного гепатита С. Из таблицы 4 видно, что большее количество людей было обследовано из города Краснодара 369 человек (37,3% от общего количества). Маркеры вирусного гепатита С обнаружены у 125 человек, что составляет 12,5% от числа обследованных на наличие ВГС.

Наши исследования показали, что районное распространение ВГС приближенно к литературным данным за 2013 год [О состоянии инфекционной заболеваемости…, 2013]: город Краснодар, Динской, Новопокровский, Щербиновский, Тихорецкий и Анапский районы показывают, относительно числа обследованных, высокие значения выявленных маркеров гепатита С. Так же наибольший процент выявленных маркеров ВГС наблюдается в Абинском районе (30,7%), Мостовском (25%), Староминском (50%), Кореновском (33%) и городе Сухуме, республики Абхазия (75%).

Среди обследованных пациентов, с зафиксированными данными, можно отметить тенденцию выявления маркеров гепатита В и С среди мужчин и женщин. Данные приведены в таблице 5.

Таблица 5 — Встречаемость вирусного гепатита В и С среди мужчин и женщин ККБ № 1

Из таблицы 5 видно, что женщин обследовано было больше чем мужчин. В процентном соотношении — у мужчин чаще выявлялись маркеры вирусного гепатита С (9,6%), чем у женщин (8,2%), что соответствует литературным данным [Эпидемиология, молекулярная биология и классификация, 2013]. Что касается маркеров гепатита В, то соотношение среди мужчин (2,6%) и женщин (2,4%) практически на одном уровне.

В ходе проведённой диагностики по выявлению маркеров вирусного гепатита В и С среди пациентов только города Краснодара количество мужчин составило 173 человека, а женщин — 196 человек. При этом положительных по ВГВ мужчин — 4 человека, женщин — 5; положительных по ВГС мужчин — 15, женщин — 17, т. е. показатели среди женщин выше, чем среди мужчин — что отличается от показателей общего количества обследованных со всех районов, где мужчины лидировали по выявленным гепатитам.

Ещё одним сравнительным критерием по проделанной работе был возраст. Возрастной диапазон пациентов Краевой клинической больницы № 1 варьировал от 6 месяцев до 94 лет. На рисунке 1 показано процентное соотношение четырёх основных возрастных групп людей, обследованных на наличие маркеров вирусных гепатитов В и С: 1-я группа от 6 месяцев до 15 лет (дети), 2-я от 16 до 25 лет, 3-я от 26 до 50 лет и 4-я группа от 51 до 94 лет.

Рисунок 1 — Отношение возрастных групп пациентов, обследованных на наличие маркеров вирусных гепатитов В и С (в %)

При рассмотрении рисунка 1 можно выделить, что возрастная группа от 51 года до 94 лет лидирует среди остальных — количество обследованных пациентов составило 810 человек (57%). В группе от 6 месяцев до 15 лет это количество равно 28 человек (2%), от 16 до 25 лет — 92 человека (7%) и с 26 до 50 лет — 470 человек (34%), что соответствует литературным данным [О состоянии инфекционной заболеваемости…, 2013]: Основной удельный вес в структуре заболевших ГС составляют взрослые и пожилые люди — 96,7%.

Рисунок 2 — Зависимость положительных результатов на наличие маркеров вирусного гепатита В и С от возрастной группы пациентов ККБ№ 1

На рисунке 2 показано соотношение возрастных групп обследованных пациентов и количество положительных результатов по ВГВ и ВГС. Из него видно, что в группе 51 — 94 года наблюдается наибольшее количество выявленных маркеров вирусного гепатита В и С (ВГВ — 18 человек, ВГС — 65 человек); на втором месте группа 26 — 50 лет (ВГВ — 16 человек, ВГС — 48 человек), в группе от 16 до 25 лет — 6 человек положительных по ВГС. Среди детей (от 6 месяцев до 15 лет) не было выявлено маркеров вирусного гепатита В и С, что соответствует литературным данным.

Что касается частоты встречаемости, то в процентном соотношении в группе 26 — 50 лет маркеры гепатита В и С лидируют: 10% составляют выявленные маркеры гепатита С и 3% составляют маркеры гепатита В (от числа обследованных в этой группе). Следующей идёт группа 51−94 года, здесь 8% приходится на маркеры гепатита С и 2% на маркеры гепатита В.

Рисунок 3 — Частота встречаемости маркеров гепатита В и С в разных возрастных группах Подводя итог по возрастному критерию можно сказать, что наиболее обследуемая группа пациентов находится в возрасте от 51 до 94 лет. Частота положительных результатов по вирусному гепатиту В и С наибольшая так же в этой группе, что соответствует литературным данным [О состоянии инфекционной заболеваемости…, 2013].

3.2 Выявление антител к вирусу кори В июне, июле 2014 года были исследованы 29 образцов крови и взяты из архивных данных (за период март — май 2014 года) 1225 образцов, которые проверялись на наличие специфических Ig G к виру кори. Общее количество исследуемых образцов составило 1254.

Исследуемые образцы учитывали как положительные (POS) при концентрации антител к вирусу кори более 0,33 МЕ/мл. Отрицательные (NEG) — при концентрации антител к вирусу кори менее 0,33 МЕ/мл. Наличие специфических Ig G, т. е. положительный результат, мог говорить о возможно предшествующей инфекции или вакцинации.

Все обследованные пациенты являлись сотрудниками Краевой клинической больницы № 1. Их обследование связанно со вспышкой вируса кори во время проведения зимней Олимпиады 2014 года.

Первым критерием для рассмотрения стало распределение обследованных пациентов Краевой клинической больницы № 1 по месяцам 2014 года, данные приведены в таблице 6.

Таблица 6 — Количество обследованных пациентов ККБ№ 1 с марта по июль 2014 года

Из полученных данных, приведённых в таблице 6, следует, что больше всего было исследовано образцов крови в апреле (881) и марте (273). Наибольшую частоту положительных результатов мы наблюдали в марте, апреле, и июле 2014 года. У пациентов, с зафиксированными данными, можно проследить наличие противокоревых Ig G среди мужчин и женщин. Женщин обследовано было 149 человек, мужчин — 42. Соотношение пола обследованных пациентов представлено на рисунке 4.

Из рисунка 4 видно, что у женщин преобладает количество положительных результатов (76) над отрицательными (73). У мужчин наблюдается обратная зависимость — количество отрицательных результатов (23) больше, чем положительных (19). Женщин, имеющих противокоревых Ig G, было в 4 раза больше, чем мужчин. Общее количество пациентов с зафиксированными данными — 191 человек.

Рисунок 4 — Соотношение POS и NEG результатов среди обследованных мужчин и женщин

Если говорить о возрастном соотношении, то можно отметить, что дети обследованы не были, а возраст пациентов варьировал от 20 до 85 лет. Данные по возрастному критерию приведены на рисунке 5.

Рисунок 5 — Распределение пациентов с антителами против кори по возрастным группам Из рисунка 5 следует, что самой многочисленной группой обследованных является группа от 20 до 40лет — 69% (132 человека). Из них 55 человек дали положительную реакцию, что говорит о наличии противокоревых Ig G к вирусу кори. В свою очередь негативную показали 77 образцов. На втором месте — группа 41 год — 60 лет -26% (49 человек). Положительных среди них зафиксировано — 34 человека, отрицательных — 15. В группе от 61 до 85 отмечено наименьшее количество обследованных — 10 человек, из них 6 с POS реакцией и 4 с NEG. Таким образом, в группе 41 год — 85 лет частота положительных результатов преобладает над отрицательными результатами, что не скажешь по отношению к группе 20 — 40 лет. Литературный источник [Министерство здравоохранения…, 2014] указывает на то, что в 2014 году на долю взрослых пришлось 45,7% от числа заболевших, а доля детей составила 54,3%. В данный период (март — июль 2014 года), дети обследованы не были.

В каждых возрастных группах, указанных ранее, удалось проследить динамику встречаемости противокоревых Ig G, которая представлена на рисунке 6.

вирусный гепатит корь инфекция Рисунок — 6 Встречаемость антител к вирусу кори в 3-х возрастных группах Из рисунка 6 видно, что в группе от 20 до 40 лет преобладает количество отрицательных результатов, на их долю пришлось 57,5% (76 человек), в свою очередь на долю положительных — 42,5% (56 человек). Во второй группе (41 год — 60 лет) картина иная: количество положительных результатов (69% от числа обследованных, т. е. 34 человека) доминирует над отрицательными (31% - 15 человек). В группе (61 — 85 лет) количество положительных результатов такое же, как количество отрицательных, 5 и 5 человек соответственно.

А так же нам удалось проследить встречаемость маркера вируса кори, сопоставив возрастные группы и пол обследованных пациентов. Результаты отображены на рисунке 7.

Рисунок 7 — Количество POS результатов, на наличие специфических антител к вирусу кори, среди мужчин и женщин в разных возрастных категориях Как видно из рисунка 7 — количество положительных результатов у женщин преобладает над положительными результатами мужчин во всех трёх возрастных группах. Так в группе 20 — 40 лет POS результаты у женщин в 3 раза преобладают над POS результатами среди мужчин (42 человека с выявленными антителами к вирусу кори у женщин и 14 человек у мужчин). От 41 до 60 лет — женщины так же превалируют, только уже в 16 раз (32 женщины с POS результатом и двое мужчин). И в группе от 61 до 85 лет женщины тоже имеют перевес, но не такой значительный как в первых двух группах — всего лишь в два раза (4 женщины и один мужчина).

Обобщив, можно сказать, что самая многочисленная группа пациентов, обследованных на наличие противокоревых Ig G, находятся в возрасте от 20 до 40 лет. Тогда как частота встречаемости противокоревых Ig G наибольшая в группе пациентов в возрасте от 41 до 60 лет. Среди женщин наблюдался наибольший процент положительных результатов.

Заключение

В июне — июле 2014 г. нами была проведена работа по определению маркеров вирусного гепатита В, С и вируса кори у пациентов разных отделений ККБ№ 1. Объектом исследования являлись образцы сывороток крови. Количество образцов обследованных на наличие вирусных гепатитов составило — 16 356. Количество сывороток проверенных на наличие специфических Ig G к вирусу кори составили — 1 254.

По итогам иммунологических исследований можно сделать следующие выводы:

1. Наибольшая частота встречаемости маркеров вирусного гепатита В наблюдалась у пациентов краевого медицинского центра (9,5%), приёмного отделения ККБ№ 1 (7,4%), Чаще всего антитела к вирусу гепатита С обнаруживали у пациентов отделения гастроэнтерологии (29,4%) и травматолого-ортопедического отделения (20,8%).

2. Проводя сравнение динамики выявления маркеров вирусных гепатитов В и С по месяцам 2014 года можно отметить, что чаще HBsAg в пробах обнаруживали в июне (65 проб) и августе (64), а с выявленными анти-HCV — в июле (252 пробы), августе (255) и сентябре (257).

3. Наибольший процент проб с маркерами ВГВ был в районах: Апшеронском (4 человека из 25 положительны), в Выселковском (2 из 16 человек), в Кущёвском районе (1 человек из 6). Наибольший процент выявленных маркеров ВГС показывал Абинский район (их 13 человек 4 человека), Мостовской район (из 8 человек — 2) и Кореновский (из 15 человек — 5).

4. Женщин, обследованных на HBsAg и анти-HCV, было больше (750 человек), чем мужчин (650 человек). Маркеры вирусного гепатита С (9,6% от числа всех обследованных), чаще встречались у мужчин, чем у женщин (ВГС- 8,2%). Маркеры гепатита В встречались примерно с одинаковой частотой и у мужчин (2,6%) и у женщин (2,4%).

5. Количество обследованных в возрасте от 51 года до 94 лет составило 810 человек (57% от числа обследованных). В этой группе выявили наибольшее количество пациентов с маркерами вирусных гепатитов В и С (ВГВ — 18 человек, ВГС — 65 человек).

6. Из 1254 обследованных пациентов на наличие антител к вирусу кори, 55% имели противокоревые Ig G. Наибольшая частота их встречаемости наблюдалась в марте (61%) и июле (77%) 2014 года. Женщин обследовано было 149 человек, мужчин — 42. Женщин, имеющих противокоревых Ig G, было в 4 раза больше, чем мужчин (76 женщин и 19 мужчин).

7. Самой многочисленной группой обследованных на наличие противокоревых Ig G была группа от 20 лет до 40 (69% от числа всех обследованных). В группе от 20 до 40 лет на долю положительных результатов приходилось 42,5%, женщины имели антитела к вирусу кори в 3 раза чаще чем мужчины. В возрасте от 41 года до 60 лет количество положительных результатов было 69% (от числа обследованных). В группе 61 — 85 лет было 5 положительных результатов, из них 4 положительных у женщин и у одного мужчины.

Список использованных источников

1 Алгоритм специфической лабораторной диагностики вирусных гепатитов в условиях стационара / Симонова И. А. [и др.] // Заочная академия последипломного образования. М., 2000. С. 21−78.

2 Алтынбекова С. А., Кусельман А. Н., Яковенко Э. И. Клинико-иммунологические особенности современной кори. Казахстан, 1984. 284с.

3 Аракелова С. И. Дифференциальная лабораторная иммунодиагностика вирусных гепатитов. М., 200. 71с.

4 Баранова А. А. Детские болезни. М., 2002. 897с.

5 Бережнова И. А. Инфекционные болезни. М., 2007. 319с.

6 Всемирная организация здравоохранения. Информационный бюллетень № 286. Корь. Режим доступа: http//www.who.int.mediacentre. Дата обращения 10.02.2015года.

7 Горячёва Л. Г., Аксёнова О. А., Железникова Г. Ф. Возрастные особенности диагностики и прогноза вирусного гепатита С. СПб., 2004. 30с.

8 Демиденко Т. П., Каменцева А. Н., Кузнецов Н. И. Хронические вирусные гепатиты (этиология, патогенез, подходы к терапии). СПб., 2003. 44с.

9 Долгов В. В., Ракова Н. Г., Колупаев В. Е. Иммуноферментный анализ в клинико-диагностических лабораториях. М., 2007. 320с.

10 Ефимова Н. А. Эпидемиологические особенности вирусных гепатитов В и С и описторхоза на территории, эндемичной по этой инвазии. Тюмень. 2010. 154с.

11 Зверев В. В., Бойченко М. Н. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Т2. М., 2010. 480с.

12 Излечим ли хронический гепатит С? / Моисеев С. В. [и др.] // Клиническая гепатология. № 2. М., С. 70−82

13 Инфекционная заболеваемость в Российской Федерации за январь — сентябрь 2013 года.

14 Инфекционные болезни / Пак С. Г [и др.]. М., 2008, 368с.

15 Кишкун А. А. Руководство по лабораторным методам диагностики. М., 2007. 800с.

16 Клинико-эпидемиологическая характеристика и геновариантная структура HCV-инфекции на территории Краснодарского края / Авдеева М. Г. [и др.] // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2013. № 6. С. 8−16.

17 Коротяев А. И., Бабичев С. А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. СПб., 2012. 781с.

18 Корь. ВОЗ. Режим доступа: http//www.who.int.mediacentre. Дата обращения: 02.02.2014 года.

19 Кузьменко Л. Г., Овсянников Д. Ю., Киселёва Н. М. Детские инфекционные болезни. М., 2009. 528с.

20 Лобзин Ю. В. Хронические вирусные гепатиты. СПб., 2004. 33с.

21 Лобзин Ю. В., Жданов К. В., Волжанин В. М. Вирусные гепатиты: клиника, диагностика, лечение. СПб., 2003. 105с.

22 Люлякова Е. А., Вершинина М. В. Вирусные гепатиты. Ростов-на-Дону, 2007. 127с.

23 Майер К. П. Гепатит и последствия гепатита. М., 1999. 431с.

24 Маркеры гепатита В. Вектор-Бест. Новосибирск., 2013. 17с.

25 Министерство здравоохранения Краснодарского края. О состоянии инфекционной заболеваемости и инфекционной службы в Краснодарском крае в 2012;13 году. Режим доступа: www. skib-krasnodar. ru. Дата обращения: 24.01.2015 год.

26 Николаева Л. И. Вирус гепатита С: антигены вируса и реакция на них иммунной системы макроорганизма. Новосибирск., 2009. 78с.

27 О состоянии инфекционной заболеваемости и инфекционной службы в Краснодарском крае в 2013 — 2014 году.

28 Обрядина А. П. Диагностика гепатита В. Н. Новгород., 2005. 40с.

29 Обрядина А. П. Диагностика гепатита С. Н. Новгород., 2006. 33с.

30 Поздеев О. К. Медицинская микробиология. М., 2001. 768с.

31 Подымова С. Д. Болезни печени. М., 1993. 544с.

32 Попова Ю. С. Гепатит. Самые эффективные методы лечения. СПб., 2009. 205с.

33 Протокол диагностики и лечения больных вирусными ге6патитами В и С / Ющук Н. Д. [и др.] // Министерство здравоохранения РФ. М., 2010. С. 11−20

34 Рекомендации по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом с / Яковлева Т. В. [и др.] // Министерство здравоохранения РФ. М., 2013. С. 20−43.

35 Самарина В. Н., Сорокина О. Детские инфекционные болезни. Санкт-Петербург, 2001. 336с.

36 Серов В. В., Апросина З. Г. Хронический вирусный гепатит. М., 2004. 383с.

37 Чуприлин М. П., Каткасова Л. Г., Алексеев Д. Г. Внутрибольничные вирусные гепатиты в отделениях хирургического профиля: риски инфицирования и методы профилактики // Охрана труда и техника безопасности в учреждениях здравоохранения. Самара, 2013. № 8. С. 16−21.

38 Шмитько А. Д., Костинов П. М., Бочарова И. И. Уровень защиты к вирусу кори беременных женщин // 22 национальный конгресс по болезням органов дыхания. М., 2012. С. 120−123.