Питательные среды, на которых выращивают микроорганизмы, должны отвечать следующим минимальным требованиям: в них должны присутствовать все элементы, из которых строится клетка, причем в такой форме, в которой микроорганизмы способны их усваивать. Удачный выбор питательной среды и благоприятных условий для размножения и роста исследуемого микроба является основой, обеспечивающей успешность исследований. Показателем качества питательной среды является успешность роста на ней исследуемого микроба с сохранением всех присущих этому штамму свойств. Для процессов роста и размножения микроорганизмы должны получать все вещества, которые необходимы для биосинтеза клеточных компонентов и получения энергии. Эти вещества, называемые питательными, должны содержаться в культуральной (питательной) среде, при этом в количествах, соответствующих специфическим потребностям данного микроорганизма.
Элементы, которые в первую очередь необходимы для роста микроорганизмов и должны включаться в состав питательной среды, определенные из химического состава микробных клеток, который, в принципе, одинаков у всех живых организмов. Состав питательной среды для культивирования бактерии Escherichia, содержащей дикий dapA ген бактерии В. subtilis следующий, который приведен в таблице 3.2 [5].
Табл. Состав питательной среды.
|
Компоненты питательной среды. | Масса г/л. |
((NH4)2SO4 | |
KH2PO4,. | |
MgSO4· 7H2O. | |
FeSO4· 7H2O. | 0,01. |
MnSO4· 5H2O. | 0,01. |
дрожжевой экстракт. | |
L-метионин. | 0,5. |
L-треонин. | 0,1. |
г/л L-изолейцин. | 0,05. |
Также желательно добавлять в среду антибиотики (например, ампициллин) для поддержания селективности и стабильности трансформированных бактерий Escherichia. Для получения среды для культивирования стерилизованный раствор (содержащий, при рН 7,0) смешивают со стерилизованным 20%-ным раствором глюкозы в соотношении 4 к 1. Также можно добавить глюкозу для улучшения производства L-лизина.
Затем к смеси добавляют стерилизованный фармакопейный СаСО3 и разводят до конечной концентрации 30 г/л.
