Изучение фенольных соединений методом ВЭЖХ

Анализ проводили в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография» (ВЭЖХ) ГФ XII изд. [30] на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы «Gilston» (модель 305, Франция), инжектор ручной модель «Rheodyne» 7125 (США). Содержание рассчитывали методом абсолютной калибровки с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром для «Windows». В качестве неподвижной фазы использована металлическая колонка Platinum EPS C 18 100 A (или Kromasil) 4,6×250 мм с размером частиц 5 мкм. Подвижная фаза: метанол-водакислота фосфорная конц. (400:600:5). Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 0,5−0,8 мл/мин при продолжительности подачи от 70 до 180 мин. Детектирование осуществляли с помощью УФ-детектора «Gilston» UV/VIS, модель 151, при длине волны 254 нм.

Анализу подвергали спиртовое извлечение из сырья (70% C2H5OH; 1:5; t кип., 2 часа). Параллельно с исследуемым извлечением готовили серию 0,05% растворов стандартных образцов в 70% спирте этиловом: изосалипурпозида, рутина, кверцетина, лютеолина, лютеолин-7-гликозида, галловой кислоты, кофейной кислоты, хлорогеновой кислоты, коричной кислоты, гиперозида, гесперидина, апигенина, арбутина, феруловой кислоты, изоферуловой, виценина, витексина, 4-оксикумарина, скополетина, салициловой кислоты, неохлороеновой кислоты, эллаговой кислоты, робинина, дикумарина, кумарина, умбеллиферона, дигидрокверцетина, катехина, ориентина.

Идентификацию разделенных веществ проводили путем сопоставления времен удерживания пиков, полученных на хроматограмме пробы, с временами удерживания растворов стандартных образцов. Оценку количественного соотношения идентифицированных веществ в исследуемых образцах проводили по площади пиков, используя метод нормализации.

Физические методы анализа фенольных соединений

УФ-спектры поглощения снимали на спектрофотометре СФ-2000 в кюветах с толщиной слоя 10 мм в области от 200 до 600 нм. ИК-спектры записывали на спектрофотометре UR-20 «Specord» (с призмами NaCl и NaF, концентрация вещества 0,5%) в таблетках калия бромида высотой 1 мм в области 700−4000 см-1. Температуру плавления определяли на блоке Кофлера. Нагрев проводили со скоростью 40 С/мин, повторяя замеры не менее 3 раз.